Миф позволяет чувствительны обнаружения переходных и стабильного взаимодействия между белками, которые выражаются в модели CEREVISIAE организме Saccharomyces. Она была успешно применена для изучения экзогенных и дрожжи интегральные мембранные белки с целью выявления их взаимодействия партнеров в высоком образом пропускную способность.
Фундаментальные биологические и клинические важность интегральные мембранные белки стимулировали развитие дрожжей-системы для высокой пропускной способности идентификации белок-белковых взаимодействий (PPI) за полнометражный белками трансмембранного. С этой целью в нашей лаборатории разработаны сплит-убиквитин основан дрожжей Мембрана два-Hybrid (МИФ) системы. Эта технология позволяет чувствительны обнаружения переходных и стабильных белковых взаимодействий использованием<em> Saccharomyces CEREVISIAE</em> Как организма-хозяина. Миф использует наблюдение, что убиквитин могут быть разделены на два устойчивых фрагментов: С-концевой половине дрожжей убиквитин (C<sub> Иь</sub>) И N-концевую часть убиквитин фрагмент (N<sub> Иь</sub>). В МИФ, этот принцип адаптирован для использования в качестве "датчика" белок-белковых взаимодействий. Короче говоря, интегральный белок мембраны приманка сливается с C<sub> Иь</sub>, Которая связана с искусственным фактором транскрипции. Prey белки, либо в формате индивидуальных или библиотеку, слиты в N<sub> Иь</sub> Части. Белки взаимодействия между приманкой и добычу приводит к изменению состава убиквитин фрагменты, образуя полнометражных "псевдо-убиквитин" молекулы. Эта молекула в свою очередь, признаются цитозольного deubiquitinating ферментов, в результате расщепления фактора транскрипции и последующей индукции репортер экспрессии генов. Система легко адаптируется, и особенно хорошо подходит для высокопроизводительного скрининга. Он был успешно применен для исследования взаимодействий с помощью интегральных мембранных белков с обеих дрожжей и других организмов.
Миф первый высокой пропускной способности системы, что позволяет идентифицировать взаимодействие между полнометражный мембранных белков и цитозольного или мембраной партнеров. Он был использован для изучения мембранных белков из различных организмов [3-7]. Есть, однако, конкретные де…
The authors have nothing to disclose.
Мы хотели бы поблагодарить Рассвет Эдмондс для критического прочтения этой статьи. Лаборатория Stagljar поддерживается за счет средств Канадского фонда для инноваций (CFI), Канадский институт исследований в области здравоохранения (CIHR), сердца и инсульта фонда Канадского общества рака, и Novartis.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Polyethenlene Glycol (PEG3350) | Bioshop | PEG335 | ||
Lithium Acetate Bihydrate | Bioshop | LIA001 | ||
X-Gal (5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-b-D-galactopyranoside) | Bioshop | XGA001 | ||
N`,N-dimethyl formamide | Bioshop | DMF 451 | ||
3-amino-1,2,4-triazole (3-AT) | Bioshop | ATT124 | ||
Sodium phosphate dibasic | Bioshop | SPD307 | ||
Sodium phosphate monobasic | FisherBiotech | BP329-500 | ||
Salmon Sperm DNA | VWR | CA80601-120 | ||
D-Glucose | Bioshop | GLU501 | ||
LB Broth LENOX | Bioshop | LBL405 | ||
Yeast Nitrogen Base | Bioshop | YNB406 | ||
Yeast Extract | Bioshop | YEX401 | ||
Peptone | Beckton Dickinson | 211677 | ||
Bio-Tryptone | Bioshop | TRP402 | ||
Adenine Sulphate | Bioshop | ADS201 | ||
L-Uracil | Bioshop | URA241 | ||
L-Threonine | Bioshop | THR002 | ||
L-Histidine | Bioshop | HIS200 | ||
L-Methionine | Bioshop | MET222 | ||
L-Valine | Bioshop | VAL201 | ||
L-Phenylalanine | Bioshop | PHA302 | ||
L-Isoleucine | Bioshop | ISO910 | ||
L-Tyrosine | Bioshop | TYR333 | ||
L-Leucine | Bioshop | LEU222 | ||
L-Arginine | Bioshop | ARG006 | ||
L-Tryptophane | FisherBiotech | BP395-100 | ||
L-Lysine | Bioshop | LYS101 | ||
L-Alanine | FisherBiotech | BP369-100 | ||
Agar | Bioshop | AGR001 | ||
Soda Lime Galss Beads | BioSpec Product | 11079105 | ||
Sodium Chloride | Bioshop | SLD002 |