Respostas eletrofisiológicas de neurônios sensoriais olfativos de odores pode ser medido em insetos usando gravações sensillum único. Neste artigo vamos demonstrar de vídeo como realizar gravações sensillum única nas antenas da mosca do vinagre (<em> Drosophila melanogaster</em>) E os palpos maxilares do mosquito da malária (<em> Anopheles gambiae</em>).
O sentido do olfato é essencial para insetos para encontrar alimentos, companheiros, predadores, e os locais de oviposição 3. Inseto neurônios sensoriais olfativos (ORS) são colocados em pêlos sensoriais chamados sensilla, que cobrem a superfície dos órgãos olfativos. A superfície de cada sensillum é coberta com minúsculos poros, através do qual odorants passar e dissolver em um líquido chamado linfa sensillum, que banha os dendritos sensorial do ORS alojados em um sensillum dado. Os dendritos OSN expressar odorant receptor (OR) proteínas, que em insetos funcionam como canais iónicos dependentes de odor 4, 5. A interação de odores com ORs aumenta ou diminui a taxa de disparo basal da OSN. Esta atividade neuronal na forma de potenciais de ação incorpora a primeira representação da qualidade, intensidade e características temporais do odorant 6, 7.
Dado o fácil acesso a estes pêlos sensoriais, é possível realizar gravações extracelular de ORS único pela introdução de um eletrodo de registro para a linfa sensillum, enquanto o eletrodo de referência é colocado na linfa dos olhos ou do corpo do inseto. Em Drosophila, sensilla casa entre uma e quatro ORS, mas cada OSN normalmente exibe uma amplitude pico característico. Técnicas de classificação de Spike torná-lo possível atribuir respostas spiking a ORS individual. Este single sensillum técnica de gravação (SSR) monitora a diferença de potencial entre a linfa sensillum eo eletrodo de referência como os pontos elétricos que são gerados pela atividade do receptor de ORS 1, 2, 8. Mudanças no número de espigas, em resposta ao odor representam a base celular do odor de codificação em insetos. Aqui, descrevemos o método de preparação usado atualmente em nosso laboratório para realizar SSR em Drosophila melanogaster e Anopheles gambiae, e mostrar os traços representante induzida pela odores de forma sensillum específicos.
Pistas olfativas são usados por organismos para identificar fontes de alimento, parceiros em potencial, e predadores. Neurônios sensoriais olfativos (ORS) são o centro primeiro relé entre estímulos externos e os centros superiores do cérebro onde a informação é processada. Em Drosophila melanogaster e Anopheles gambiae, ORS são facilmente acessíveis e sua atividade elétrica pode ser monitorada enquanto estimulado por puffs odor.
A única técnica de grava?…
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Paraffin oil | Odors | Fluka | 76235 | |
High purity odors (>98%) | Odors | Sigma-Aldrich | Methyl acetate #296996 1-octen-3-ol #74950 |
|
Filter paper strips | Odors | Fisherbrand | 05-714-1 | Chromatography paper |
Connectors | Odors | Cole-Parmer | EW-06365-40 | 1/16×1/8″ |
Glass vials | Odors | Agilent Technologies | 5182-0556 | |
Air line plastic tubing | Odor Delivery | Python Products | 500PAL | |
1 serological pipette | Odor Delivery | Corning | 4101 | 10 mL |
Plastic tubing | Odor Delivery | Cole-Parmer | EW-06418-0 | 0.050″x0.090″OD |
Disposable borosilicate glass Pasteur pipettes | Odor Delivery | FisherBrand | 13-678-20A | 5-3/4 inches |
Programmable stimulus controller | Odor Delivery | Syntech | CS-55 | |
Anti-vibration table | Electrophysiology Equipment | TMC | 63533 | 36”Wx30”Dx29”H |
Faraday cage | Electrophysiology Equipment | TMC | MI8133303 | |
Inverted microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | E600FN ECLIPSE | Recording microscope |
10x and 100x objectives | Electrophysiology Equipment | Nikon | 10x Plan Fluor 100x L Plan | |
Dissecting microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | EZ645 | electrode sharpening/insect prep microscope |
Magnetic stands | Electrophysiology Equipment | Newport | MODEL 150 | |
IDAC | Electrophysiology Equipment | Syntech | IDAC-4 | |
Acquisition software | Electrophysiology Equipment | Syntech | Autospike | |
1 macromanipulator | Electrophysiology Equipment | NARISHIGE | MN-151 | Joystick manipulator Used for positioning reference electrode |
1 micromanipulator | Electrophysiology Equipment | EXFO | PCS-6000 | Used for positioning recording electrode |
Crocodile clip | Electrophysiology Equipment | Pomona | AL-B-12-0 | |
Electric cable | Electrophysiology Equipment | Pomona | B-36-0 | Test Cable Assembly |
2 electrode holders | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Electrode holders (set of 2) for tungsten wire electrode |
AC probe | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Universal single ended probe (10xAC) |
Tungsten electrodes | Electrophysiology Equipment | Microprobes | M210 | straight tungsten rods, 0.005“x3“ |
Potassium hydroxide | Electrophysiology Equipment | Sigma-Aldrich | 221473 | |
Syringe | Electrophysiology Equipment | BD | 301625 | 20 mL |
Power supply | Electrophysiology Equipment | WILD HEERBRUGG 6V 40W | e.g MTR32 | |
Vertical puller | Insect prep | Narishige | PB-7 | |
Razor blade | Insect prep | VWR | 55411-050 | |
Dental wax | Insect prep | Patterson | 091-1503 | |
Microscope slide | Insect prep | FisherBrand | 12-550A | |
Cover glass | Insect prep | FisherBrand | 12-541A | 18X18 #1.5 |
Polypropylene mesh | Insect prep | Small Parts inc. | CMP-0500-B | |
Glass electrode | Insect prep | Frederick Haer & Co. | 27-32-0-075 | Capillary tubing borosilicate 1.5mm OD x 1.12mm ID x 75 mm |
Double-sided tape (3M) | Insect prep | 3M | MMM6652P3436 | Double-sided tape (3M) |
Forceps | Insect prep | Fine Science Tools | 021×0053 | Dumont #5 Mirror Finish Forceps |
Small plastic cup | Insect prep | VWR | 89009-662 | 7 x 5.7 (23/4 x 21/4) |
Electric aspirator | Insect prep | Gempler’s | RHM200 |