מכשיר microfluidic לכימות Chemotaxis חיידקים Gradients ריכוז אורווה
Summary
פרוטוקול זה מתאר את הפיתוח של המכשיר microfluidic לחקירת chemotaxis חיידקים הדרגתיים ריכוז יציב של chemoeffectors.
Abstract
Chemotaxis מאפשרת לחיידקים להתקרב למקורות של כימיקלים attractant או להימנע ממקורות של כימיקלים דוחה. חיידקים מנטרים את הריכוז של chemoeffectors ספציפי על ידי השוואת הריכוז הנוכחי לריכוז זיהה כמה שניות קודם לכן. השוואה זו קובעת את כיוון נטו של התנועה. למרות מרובים, הדרגתיים מתחרים לעתים קרובות להתקיים בטבע, גישות קונבנציונליות על חקירת chemotaxis חיידקים הם לא טובים לכימות הגירה בתגובה הדרגתיים ריכוז ו דוחי משיכה. כאן אנו מתארים את הפיתוח של מודל chemotaxis microfluidic להצגת הדרגתיים ריכוז מדויק ויציב של chemoeffectors כדי חיידקים כמותית בחקירת תגובתם הדרגתי שהוחל. המכשיר הוא צדדי כי הדרגתיים ריכוז של כל ריכוז מוחלט הרצוי כוח הדרגתי יכול להיווצר בקלות על ידי ערבוב diffusive. המכשיר הוא הוכיח באמצעות תגובת<em> Escherichia coli</em> RP437 הדרגתיים של חומצות אמינו ויונים ניקל.
Protocol
Discussion
מקדם החלוקה chemotaxis (CPC) ואת מקדם ההגירה chemotaxis (CMC) יכול להיות מחושב כפי שמתואר מאו ואח' 5. אם תא מזוהה בצד ריכוז גבוה, הוא מקבל ערך של 1, ואילו תא זוהה בצד ריכוז נמוך ניתנת ערך של -1. הערכים סיכם ואמר מחולק במספר הכולל של תאים כדי להפיק את העלות. הסימן של עלות לקלי?…
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי הקרן הלאומית למדע (CBET 0,846,453).
Referências
- McDonald, J. C. Prototyping of microfluidic devices in poly(dimethylsiloxane) using solid-object printing. Anal Chem. 74, 1537-1545 (2002).
- Hansen, M. C., Palmer, R. J. J., Udsen, C., White, D. C., Molin, S. Assessment of GFP fluorescence in cells of Streptococcus gordonii under conditions of low pH and low oxygen concentration. Microbiol. 147, 1383-1391 (2001).
- Englert, D. L., Manson, M. D., Jayaraman, A. A Flow-Based Microfluidic Device for Quantifying Bacterial Chemotaxis in Stable, Competing Gradients. Appl Environ Microbiol. 75, 4557-4564 (2009).
- Englert, D. L., Jayaraman, A., Manson, M. D. . Microfluidic techniques for the analysis of bacterial chemotaxis. , (2009).
- Mao, H., Cremer, P. S., &, M. a. n. s. o. n. A sensitive, versatile microfluidic assay for bacterial chemotaxis. PNAS. 100 (9), 5449-5454 (2003).
