Микрожидкостных Устройство для Количественная Бактериальные Хемотаксис в стабильных градиента концентрации
Summary
Этот протокол описывает развитие микрожидкостных устройств для исследования бактериальной хемотаксис в стабильных градиенты концентраций chemoeffectors.
Abstract
Хемотаксис позволяет бактериям подход источников аттрактанта химических веществ, или чтобы избежать источников репеллент химикатов. Бактерии постоянно контролировать концентрацию конкретных chemoeffectors путем сравнения текущей концентрации к концентрации обнаружены несколько секунд раньше. Это сравнение определяет чистая направление движения. Хотя многочисленные, конкурирующие градиенты часто сосуществуют в природе, традиционные подходы для исследования бактериальной хемотаксис населения недостаточны для количественного миграции в ответ на градиентов концентрации аттрактанты и репелленты. Здесь мы описываем развитие микрожидкостных модель хемотаксиса для представления точных и стабильных градиентов концентрации chemoeffectors к бактериям и количественном исследовании их реакции на применяемые градиента. Устройство является универсальным в том, что концентрация градиенты любой желаемой абсолютной концентрации и градиент силы могут быть легко порожденных диффузионного перемешивания. Устройство продемонстрировать с помощью реакции<em> Кишечной палочки</em> RP437 к градиенты аминокислот и ионов никеля.
Protocol
Discussion
Коэффициент хемотаксис раздела (КТК) и коэффициент хемотаксис миграции (CMC) может быть рассчитана, как описано в Мао и др. 5. Если ячейка обнаружена высокая концентрация стороны, ему присваивается значение +1, тогда как клетка обнаружены на низкой стороне концентрация дается з?…
Acknowledgements
Эта работа была выполнена при частичной поддержке Национального научного фонда (конбет 0846453).
Referências
- McDonald, J. C. Prototyping of microfluidic devices in poly(dimethylsiloxane) using solid-object printing. Anal Chem. 74, 1537-1545 (2002).
- Hansen, M. C., Palmer, R. J. J., Udsen, C., White, D. C., Molin, S. Assessment of GFP fluorescence in cells of Streptococcus gordonii under conditions of low pH and low oxygen concentration. Microbiol. 147, 1383-1391 (2001).
- Englert, D. L., Manson, M. D., Jayaraman, A. A Flow-Based Microfluidic Device for Quantifying Bacterial Chemotaxis in Stable, Competing Gradients. Appl Environ Microbiol. 75, 4557-4564 (2009).
- Englert, D. L., Jayaraman, A., Manson, M. D. . Microfluidic techniques for the analysis of bacterial chemotaxis. , (2009).
- Mao, H., Cremer, P. S., &, M. a. n. s. o. n. A sensitive, versatile microfluidic assay for bacterial chemotaxis. PNAS. 100 (9), 5449-5454 (2003).
