Diffusible संकेतन अणुओं की योग्यता को भ्रूणीय स्पाइनल Commissural axons नई दिशा परख
Summary
इस परख संकेत अणु की क्षमता, यहाँ अस्थि Morphogenetic 7 प्रोटीन (BMP7), commissural axons नई दिशा का आकलन. भ्रूण पृष्ठीय रीढ़ की हड्डी का एक explant COS कोशिकाओं स्रावित उम्मीदवार वृद्धि कारकों की कुल करने के लिए आसन्न सुसंस्कृत है. पुनर्भिविन्यासित commissural explant के भीतर बढ़ रही axons immunohistochemistry द्वारा कल्पना कर रहे हैं.
Abstract
हड्डीवाला रीढ़ की हड्डी में 1 पृष्ठीय commissural axons एक अमूल्य मॉडल प्रणाली है जिसमें अक्षतंतु मार्गदर्शन संकेतों की पहचान करने के लिए किया गया है. यहाँ, हम इन विट्रो परख, "पुनरभिविन्यास परख", कि बड़े पैमाने पर इस्तेमाल किया गया है commissural axons के उन्मुखीकरण 2 पर बाह्य और आंतरिक संकेतों के प्रभाव का अध्ययन में एक वर्णन. इस परख जेन डोड, थॉमस Jessell और एंड्रयू Lumsden की प्रयोगशालाओं में कई लोगों द्वारा विकसित किया गया था (अधिक जानकारी के लिए acknowledgments देखें) और इस परख के संस्करणों के लिए कुंजी अक्षतंतु मार्गदर्शन अणुओं के पुनरभिविन्यास गतिविधियों का प्रदर्शन किया गया chemorepellent बीएमपी में सहित, छत प्लेट 3,4 और 5 Netrin1 और ध्वनि (श्श्श) हाथी रीढ़ की हड्डी में फर्श की थाली में 6 के chemoattractive गतिविधियों .
पृष्ठीय रीढ़ की हड्डी के दो तिहाई के 2-3 खंडों शामिल Explants भ्रूण (ई) दिन 11 चूहों से विच्छेदित कर रहे हैं और तीन आयामी कोलेजन 7 जैल में सभ्य. E11 पृष्ठीय रीढ़ की हड्डी explants नव जन्म commissural न्यूरॉन्स, जो उनके ग्लाइकोप्रोटीन, 8 tag1 axonal अभिव्यक्ति के द्वारा पहचाना जा सकता है है होते हैं. संस्कृति में 30-40 घंटे के दौरान, commissural अक्षतंतु प्रक्षेपवक्र vivo में देखा है कि इसी तरह एक बार कोर्स के साथ इन पृष्ठीय explants में recapitulated है. यह axonal प्रक्षेपवक्र या तो परीक्षण ऊतकों या COS सेल पृष्ठीय explant के पार्श्व किनारों के साथ संपर्क में एक उम्मीदवार संकेत अणु व्यक्त कुल रखकर चुनौती दी जा सकती है. Commissural संलग्न ऊतक के आसपास के क्षेत्र में विस्तार axons दोनों अंतर्जात छत प्लेट और अस्थानिक पार्श्व ऊतक से संकेतों के प्रभाव के तहत विकसित होगा. डिग्री के लिए जो commissural axons इन परिस्थितियों के तहत पुनर्भिविन्यासित हैं मात्रा निर्धारित किया जा सकता है. इस परख का प्रयोग, यह संभव है दोनों एक विशेष commissural axons इस commissural 9 प्रक्षेपवक्र प्रत्यक्ष संकेत के लिए आवश्यकता के रूप में अच्छी तरह से 3,4 नई दिशा का संकेत के प्रचुरता की जांच करने के लिए.
Protocol
Discussion
महत्वपूर्ण कारक है कि इस परख प्रदर्शन में सफलता का निर्धारण पहली बार कर रहे हैं, ऊतक भी लंबे समय अवधि के लिए dispase के साथ नहीं किया जा इलाज किया जाना चाहिए, इस तरह के उपचार के ऊतक बहुत चिपचिपा बनने और व्यवहा?…
Acknowledgements
इस प्रोटोकॉल जेन डोड, थॉमस Jessell और एंड्रयू Lumsden की प्रयोगशालाओं में विकसित किया गया था. कोनराड Basler, एन Calof, थॉमस Edlund, फिल हैमिल्टन Domna Karagogeos, एरियल Ruiz मैं Altaba और Toshiya यामादा सहित कई लोग निर्धारित कैसे कोलेजन में रीढ़ की हड्डी की संस्कृति explants. Marysia Placzek और मार्क Tessier – Lavigne अक्षतंतु मार्गदर्शन के अणुओं की पहचान के एक साधन के के रूप में इन विट्रो explants में से अक्षतंतु विकास का उपयोग करने की तकनीक का बीड़ा उठाया है. बटलर प्रयोगशाला में कार्य मार्च ऑफ डाइम्स और NS063999 R01 के NIH / NINDS से से अनुदान द्वारा समर्थित है.
Referências
- Altman, J., Bayer, S. A. . The development of the rat spinal cord. , (1984).
- Placzek, M. Tissue recombinations in collagen gels. Methods in molecular biology. , 325-335 (2008).
- Augsburger, A., Schuchardt, A. BMPs as mediators of roof plate repulsion of commissural neurons. Neuron. 24, 127-141 (1999).
- Butler, S. J., Dodd, J. A role for BMP heterodimers in roof plate-mediated repulsion of commissural axons. Neuron. 38, 389-401 (2003).
- Kennedy, T. E., Serafini, T. Netrins are diffusible chemotropic factors for commissural axons in the embryonic spinal cord. Cell. 78, 425-435 (1994).
- Charron, F., Stein, E. The morphogen sonic hedgehog is an axonal chemoattractant that collaborates with netrin-1 in midline axon guidance. Cell. 113, 11-23 (2003).
- Lumsden, A. G., Davies, A. M. Chemotropic effect of specific target epithelium in the developing mammalian nervous system. Nature. 323, 538-539 (1986).
- Dodd, J., Morton, S. B. Spatial regulation of axonal glycoprotein expression on subsets of embryonic spinal neurons. Neuron. 1, 105-116 (1988).
- Yamauchi, K., Phan, K. D., Butler, S. J. BMP type I receptor complexes have distinct activities mediating cell fate and axon guidance decisions. Development. 135, 1119-1128 (2008).
