细胞透水交联剂DSP [dithiobis(琥珀酰亚胺丙酸)]稳定短暂和不稳定的相互作用<em>在体内</em>,这使得他们的隔离,使用严格的蛋白质复合体的净化技术。在这里,我们目前培养的交联,由免疫蛋白复合物的分离细胞的技术。
蜂窝机械的动态性质经常是建立在瞬态和/或弱蛋白协会。这些低亲和力相互作用排除围绕一个感兴趣的蛋白质,蛋白质网络的隔离和识别的严格方法。使用化学交联剂允许的不稳定相互作用的选择性稳定,从而绕过生化净化的局限性。在这里,我们提出在文化协议细胞适合使用一个homobifunctional交联剂间隔臂12埃,dithiobis(琥珀proprionate)(DSP)。 DSP是一个分子中的二硫键还原裂解。交联与磁珠的利益的蛋白质与免疫层析相结合,使蛋白质复合物,否则将不能承受净化隔离。此协议是与常规免疫印迹技术兼容,它可以扩展为蛋白质鉴定的质谱1。
斯蒂芬妮A. Zlatic和珠江五莱德贡献同样对这项工作。
DSP,膜渗透,化学还原与12 Å间隔臂的交联剂是用来稳定瞬态蛋白质相互作用 1,2,3,4 。在这里,我们体现这一战略与AP – 3适配器复杂的一种可溶性蛋白复合物,囊泡膜蛋白识别和排序,从内涵体 5 。 AP – 3的选择性结合的锌转运ZnT3和脂质激酶磷酸肌醇4激酶II型阿尔法但不转铁蛋白受体 1,4,6 。我们扩大了这些意见,以确定质谱 1膜蛋白和胞质因素AP – 3蛋白的相互作用…
这项工作是支持的美国国立卫生研究院的VF(NS42599和GM077569)的赠款。