המודל של טרשת עורקים Flow-induced מופרע על העורק הראשי עכבר ידי קשירת חלקי שיטה פשוטה של בידוד RNA מן התרדמה האנדותל
Summary
זה מתאר ניתוח חלקי קשירת הראש, מה שגורם תנאי הזרימה מופרע והתפתחות טרשת עורקים הבאות (בעוד שבועיים) עם כלי דם, ניאו intraplaque (ארבעה שבועות) בעורק התרדמה המשותף העכבר. כמו כן, אנו מתארים שיטה חדשה של בידוד RNA מן התרדמה אינטימה, מתן RNA הטוהר גבוהה האנדותל.
Abstract
למרות העמותה הידועה קרוב, ראיות ישירות לקשר לזרום מופרע כדי atherogenesis כבר חסר. השתמשנו לאחרונה גירסה שונה של הראש שיטות קשירת חלקית [1,2] להראות כי בחריפות גורם התנאים תזרים נמוך oscillatory, שני מאפיינים מרכזיים של זרימת מופרע, בעורק התרדמה המשותף העכבר. באמצעות מודל זה, יש לנו עדות ישירה כי הזרימה מופרע אכן מוביל להתפתחות טרשת עורקים מהירה חזקים עכבר נוקאאוט אפוליפופרוטאין E [3]. אנחנו גם פיתח שיטה של הכנה RNA אנדותל עם הטוהר גבוהה מן התרדמה עכבר אינטימה [3]. שימוש במודל עכבר שיטה, מצאנו כי קשירת גורם חלקי תפקוד אנדותל תוך שבוע, ואחריו היווצרות atheroma חזקים ומהירים בעוד שבועיים במודל של עכברים hyperlipidemic יחד עם תכונות של היווצרות נגעים מורכבים כגון neovascularization intraplaque על ידי ארבעה שבועות. זה מהיר<em> In vivo</em> מודל שיטת הכנה אנדותל RNA יכול לשמש כדי לקבוע את המנגנונים המולקולריים שבבסיס תזרים תלויי רגולציה של הביולוגיה ומחלות כלי דם. כמו כן, זה יכול לשמש כדי לבדוק התערבויות טיפוליות שונות מיקוד טרשת עורקים תפקוד האנדותל משך לימוד מופחת במידה ניכרת.
Protocol
Discussion
בהליך זה, זיהוי נכון של כל הענפים של עורק התרדמה המשותף כולל התרדמה החיצוני, עורק התרדמה הפנימי, עורק העורפית ואת העורק בלוטת התריס מעולה היא חיונית. חשוב גם לבדוק את תבנית הזרימה באמצעות אולטרסאונד כמו הדגים. בידיים שלנו מנוסים, שיעור ההצלחה של ניתוחים שלנו קשירת חלק…
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי מימון מענקי HL87012 NIH (HJ), HL75209 (HJ), UO1HL80711 (DH, DG, HJ) ו ברמה עולמית באוניברסיטת Project (HJ) ממשרד טכנולוגיה, מדע וחינוך ש קוריאה.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Normal Saline (0.9% sodium chloride) | Baxter | 2B1323 | ||
| Insulin syringe (3/10 ml 29g syringe) | Tyco Health care | 8881600145 | ||
| HBSS | Cellgro, Mediatech, Inc. | 21-023 | ||
| miRNeasy mini kit (including, QIAzol) | QIAGEN | 217004 | ||
| Vevo 770 High-Resolution Micro-Imaging System | Visualsonics | a.Visualsonics 770 system b.Imaging stage c.Vevo integrated rail system d.RMV scan head for mice |
or similar system | |
| 6-0 Silk Suture, sterile | Covidien | s-1172 c2 | ||
| Small scissors | Roboz | RS-5675 | or similar | |
| Dissecting Forceps | Roboz | RS-5005 | or similar | |
| Tissue Mend II | Webster Vet Supply | 07-856-7946 |
Referências
- Korshunov, V. A., Berk, B. C. Flow-induced vascular remodeling in the mouse: a model for carotid intima-media thickening. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (12), 2185-2191 (2003).
- Sullivan, C. J., Hoying, J. B. Flow-dependent remodeling in the carotid artery of fibroblast growth factor-2 knockout mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 22 (7), 1100-1105 (2002).
- Nam, D. Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297 (4), H1535-H1543 (2009).
