Kısmi ligasyon Fare Karotis Arter Disturbed Akış Kaynaklı Ateroskleroz ve Karotis Endotel RNA İzolasyonu Basit Bir Yöntem Bir Model
Summary
Bu fare karotis arter intraplak neo-vaskülarizasyon (dört hafta) ile rahatsız akış koşulları ve sonraki ateroskleroz gelişimi (iki hafta) neden olan bir kısmi karotis ligasyonu cerrahi, açıklamaktadır. Ayrıca, yüksek saflıkta endotel RNA, RNA izolasyonu, karotis intima yeni bir yöntem açıklanmaktadır.
Abstract
Bilinen yakın ilişki olmasına rağmen, rahatsız akış aterogenez bağlayan doğrudan kanıt eksikliği olmuştur. Biz son zamanlarda, karotis kısmi ligasyonu yöntemleri değiştirilmiş bir versiyonu kullanılmıştır [1,2], akut fare karotis arterde düşük ve salınımlı akış koşulları, rahatsız akışının iki önemli özellikleri, uyardığı göstermek için. Bu modeli kullanarak, bozulmuş akışı gerçekten Apolipoprotein E nakavt fare [3] hızlı ve sağlam ateroskleroz gelişimine yol açtığı doğrudan kanıt sağladı. Ayrıca fare karotis intima [3], yüksek saflıkta endotel RNA hazırlık bir yöntem geliştirdi. Bu fare modeli ve yöntemi kullanarak, bu kısmi ligasyonu intraplak neovaskülarizasyon gibi kompleks lezyon oluşumu özellikleri ile dört hafta boyunca bir hiperlipidemik fare modeli iki hafta içinde sağlam ve hızlı bir aterom oluşumu takip, bir hafta içinde endotelyal disfonksiyon neden bulundu. Bu hızlı<em> In vivo</em> Model ve endotel RNA hazırlama yöntemi akış bağımlı düzenleme vasküler biyoloji ve hastalıkların altında yatan moleküler mekanizmaları belirlemek için kullanılır. Ayrıca, çalışma süresi önemli ölçüde azalır, endotelyal disfonksiyon ve ateroskleroz hedefleyen çeşitli terapötik girişimlerin test etmek için kullanılabilir.
Protocol
Discussion
Bu yöntemde, eksternal karotid, internal karotid, oksipital arter ve üstün tiroid arter da dahil olmak üzere karotis tüm şube uygun bir şekilde tanımlanması çok önemlidir. Gösterildiği gibi ultrason kullanarak akış modeli doğrulamak için de önemlidir. Deneyimli ellerde, 500'den fazla farelerin ultrason çalışmaları dayalı kısmi ligasyonu ameliyatlarında başarı oranı% 90 daha iyidir. Karotis intimal RNA hazırlıkları için, ilk perfüzyon adımdan sonra, karotis görünümünü dikkat etm…
Acknowledgements
Bu çalışma, Bilim, Teknoloji ve G. Kore Eğitim Bakanlığı NIH hibe HL87012 (HJ), HL75209 (HJ), UO1HL80711 (DH, DG, HJ) ve Dünya Sınıfı Üniversitesi Projesi (HJ) fon tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Normal Saline (0.9% sodium chloride) | Baxter | 2B1323 | ||
| Insulin syringe (3/10 ml 29g syringe) | Tyco Health care | 8881600145 | ||
| HBSS | Cellgro, Mediatech, Inc. | 21-023 | ||
| miRNeasy mini kit (including, QIAzol) | QIAGEN | 217004 | ||
| Vevo 770 High-Resolution Micro-Imaging System | Visualsonics | a.Visualsonics 770 system b.Imaging stage c.Vevo integrated rail system d.RMV scan head for mice |
or similar system | |
| 6-0 Silk Suture, sterile | Covidien | s-1172 c2 | ||
| Small scissors | Roboz | RS-5675 | or similar | |
| Dissecting Forceps | Roboz | RS-5005 | or similar | |
| Tissue Mend II | Webster Vet Supply | 07-856-7946 |
Referências
- Korshunov, V. A., Berk, B. C. Flow-induced vascular remodeling in the mouse: a model for carotid intima-media thickening. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (12), 2185-2191 (2003).
- Sullivan, C. J., Hoying, J. B. Flow-dependent remodeling in the carotid artery of fibroblast growth factor-2 knockout mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 22 (7), 1100-1105 (2002).
- Nam, D. Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297 (4), H1535-H1543 (2009).
