تحليل للوضع النمط الظاهري المورفولوجية كدالة للتركيز البروتين في الخميرة الناشيء.
Summary
حذف الجينات والبروتينات overexpression طرق مشتركة لدراسة وظائف للبروتينات. في هذه المقالة ، نحن تصف بروتوكولا لتحليل تطور النمط الظاهري كدالة للتركيز البروتين في السكان وحيدة الخلية في مستويات<em> السكيراء الجعوية</em>.
Abstract
حذف الجينات والبروتينات overexpression طرق مشتركة لدراسة وظائف للبروتينات. في هذه المقالة ، نحن تصف بروتوكولا لتحليل تطور النمط الظاهري كدالة للتركيز البروتين في السكان وحيدة الخلية في مستويات<em> السكيراء الجعوية</em>. على الرغم من أن يستند هذا البروتوكول على overexpression من البروتين ، ويمكن بسهولة أن يتم تكييفها لالظواهر الصرفية تعتمد على قمع التعبير البروتين. مختبرنا يهتم بدراسة الخصائص إشارات من البروتين التقامي epsin محول. لهذا الغرض استخدمنا النهج السائد في السلبية التي نحن الافراط في التعبير عن تحفظها<u> E</u> psin<u> N</u> –<u> T</u> erminal<u> H</u> omology (ENTH) المجال لتتداخل مع مهام epsin – 2 الذاتية (أو Ent2 YLR206W). لاحظنا أن overexpression من المجال ENTH من Ent2 (ENTH2) في خلايا النوع البري أدى إلى خلية عيب الانقسام الذي يعتمد على mislocalization من عائلة من البروتينات السقالات وseptins.
Protocol
Discussion
هذا البروتوكول وصف كيفية رصد تطور النمط الظاهري المورفولوجية (خلية الخميرة غير قادر على الخضوع لانقسام الخلايا السليمة) على overexpression البروتين. عندما تفعل هذا الإجراء أنه من المهم أن نتذكر أن حصاد خلايا الخميرة التي التكوير في سرعة الطرد المركزي على النحو الموصى به أس…
Acknowledgements
نشكر بريان جي الراكون وكلوديا حنا باء للمناقشات مفيدة والدعم. وقد أيد هذا المشروع من خلال البدء الأموال من إقلاع. العلوم البيولوجية ، جامعة بوردو لر كلاوديو أغيلار والجمعية الأميركية للسرطان المؤسسية منحة بحثية لر كلاوديو أغيلار من خلال مركز السرطان بوردو.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Nocodazole | Reagent | Sigma (St. Louis, MO) | M1404 | |
| Methylene Blue 1% (w/v) | Reagent | VWR International | VW6276-0 | |
| Calcofluor White | Reagent | Sigma (St. Louis, MO) | F3543 | |
| Petroleum Jelly | Reagent | VWR International | VW3339-2 |
Referências
- Rönicke, V., Graulich, W., Mumberg, D., Müller, R., Funk, M. Use of conditional promoters for expression of heterologous proteins in Saccharomyces cerevisiae. Methods Enzymol. 283, 313-322 (1997).
- Gietz, R. D., Woods, R. A. . High efficiency transformation with lithium acetate in Molecular Genetics of Yeast: A Practical Approach. , 121-134 (1994).
- Mukherjee, D., Coon, B. G., Edwards, D. F., Hanna, C. B., Longhi, S. A., McCaffery, J. M., Wendland, B., Retegui, L. A., Bi, E., Aguilar, R. C. The yeast endocytic protein Epsin 2 functions in a cell-division signaling pathway. J Cell Sci. 122, 2453-2463 (2009).
- Sherman, F. . Getting started with yeast in Guide to Yeats genetics and Molecular Biology. , 3-21 (1991).
