नवोदित खमीर में प्रोटीन कांसंट्रेशन की एक फंक्शन के रूप एक morphological Phenotype के विकास विश्लेषण
Summary
जीन विलोपन और प्रोटीन overexpression प्रोटीन के कार्यों का अध्ययन करने के लिए सामान्य तरीके हैं. इस अनुच्छेद में, हम phenotype के विकास के प्रोटीन एकाग्रता की जनसंख्या पर एक समारोह में एकल कोशिका स्तर के रूप में विश्लेषण के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन<em> Saccharomyces cerevisiae</em>.
Abstract
जीन विलोपन और प्रोटीन overexpression प्रोटीन के कार्यों का अध्ययन करने के लिए सामान्य तरीके हैं. इस अनुच्छेद में, हम phenotype के विकास के प्रोटीन एकाग्रता की जनसंख्या पर एक समारोह में एकल कोशिका स्तर के रूप में विश्लेषण के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन<em> Saccharomyces cerevisiae</em>. हालांकि यह एक प्रोटीन की overexpression प्रोटोकॉल पर आधारित है, यह आसानी से प्रोटीन अभिव्यक्ति के दमन पर निर्भर morphological phenotypes के लिए अनुकूलित कर सकते हैं सकता है. हमारी प्रयोगशाला endocytic एडाप्टर प्रोटीन epsin के संकेत गुणों का अध्ययन करने में रुचि रखते है. उस प्रयोजन के लिए हम एक प्रमुख नकारात्मक दृष्टिकोण का इस्तेमाल किया जिसमें हम संरक्षित व्यक्त की<u> ई</u> Psin<u> एन</u> -<u> टी</u> Erminal<u> एच</u> Omology (ENTH) डोमेन क्रम में अंतर्जात epsin 2 (Ent2 या YLR206W) कार्यों के साथ हस्तक्षेप करने के लिए. हम जंगली प्रकार एक कोशिका विभाजन दोष है कि मचान प्रोटीन, septins के एक परिवार के mislocalization पर निर्भर है के लिए नेतृत्व कोशिकाओं में Ent2 (ENTH2) के ENTH डोमेन की कि overexpression मनाया.
Protocol
Discussion
इस प्रोटोकॉल का वर्णन कैसे प्रोटीन overexpression पर एक morphological phenotype (खमीर उचित कोशिका विभाजन से गुजरना करने में असमर्थ सेल) के विकास पर नजर रखने के लिए. जब इस प्रक्रिया कर रही यह महत्वपूर्ण है करने के लिए सिफारिश centrifu…
Acknowledgements
हम उपयोगी विचार – विमर्श और समर्थन के लिए ब्रायन जी Coon और Claudia बी हैना धन्यवाद. इस परियोजना रवानगी से शुरू हुआ धन के द्वारा समर्थित किया गया था. बायोलॉजिकल साइंसेज के, पर्ड्यू विश्वविद्यालय आर क्लाउडियो Aguilar और पर्ड्यू कैंसर सेंटर के माध्यम से एक अमेरिकी कैंसर सोसायटी संस्थागत अनुसंधान आर क्लाउडियो Aguilar के लिए अनुदान.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Nocodazole | Reagent | Sigma (St. Louis, MO) | M1404 | |
| Methylene Blue 1% (w/v) | Reagent | VWR International | VW6276-0 | |
| Calcofluor White | Reagent | Sigma (St. Louis, MO) | F3543 | |
| Petroleum Jelly | Reagent | VWR International | VW3339-2 |
Referências
- Rönicke, V., Graulich, W., Mumberg, D., Müller, R., Funk, M. Use of conditional promoters for expression of heterologous proteins in Saccharomyces cerevisiae. Methods Enzymol. 283, 313-322 (1997).
- Gietz, R. D., Woods, R. A. . High efficiency transformation with lithium acetate in Molecular Genetics of Yeast: A Practical Approach. , 121-134 (1994).
- Mukherjee, D., Coon, B. G., Edwards, D. F., Hanna, C. B., Longhi, S. A., McCaffery, J. M., Wendland, B., Retegui, L. A., Bi, E., Aguilar, R. C. The yeast endocytic protein Epsin 2 functions in a cell-division signaling pathway. J Cell Sci. 122, 2453-2463 (2009).
- Sherman, F. . Getting started with yeast in Guide to Yeats genetics and Molecular Biology. , 3-21 (1991).
