Oligomeric β-amyloid की तैयारी Hippocampal स्लाइसें और synaptic plasticity हानि की प्रेरण
Summary
अल्जाइमर रोग की एक विशेषता Aβ की पदोन्नति है<sub1-42></sub> पेप्टाइड. यहाँ हम सिंथेटिक Aβ तैयार करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान<sub1-42></sub> Oligomers, जो hippocampal दीर्घकालिक potentiation impairs एक सेलुलर स्मृति के सहसंबंधी. यह प्रक्रिया Aβ प्रेरित विकृति और दवा स्क्रीनिंग के तंत्र की जांच करने के लिए उपयोगी है.
Abstract
Synaptic कनेक्शन की हानि सूक्ष्म amnesic अल्जाइमर रोग (ई.) के प्रारंभिक चरणों में होने वाली परिवर्तन आबाद होने की संभावना है. (Aβ) β-amyloid, एक पेप्टाइड ई. में उच्च मात्रा में उत्पादित, दीर्घकालिक potentiation (LTP), सीखने और स्मृति के एक सेलुलर सहसंबंधी को कम करने के लिए जाना जाता है. दरअसल, LTP Aβ द्वारा कारण हानि ई. मॉडल में और स्क्रीनिंग कम करने या लौटना ऐसे synaptic impairments के सक्षम दवाओं के लिए synaptic dysfunctions के अध्ययन के लिए एक उपयोगी प्रयोगात्मक प्रतिमान है. अध्ययनों से पता चला है कि Aβ अपनी oligomeric फ़ॉर्म के द्वारा LTP व्यवधान preferentially उत्पादन. यहाँ हम oligomerized सिंथेटिक के छिड़काव से आई. LTP के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल तीव्र hippocampal स्लाइस पर Aβ1-42 पेप्टाइड प्रदान. इस वीडियो में, हम oligomeric Aβ की तैयारी के लिए एक कदम दर कदम प्रक्रिया की रूपरेखा<sub1-42></sub>. फिर, हम एक व्यक्ति है जो प्रयोग में LTP hippocampal oligomerized Aβ को उजागर स्लाइस में कम है का पालन करें<sub1-42></sub> जहाँ कोई Aβ एक नियंत्रण प्रयोग में स्लाइस की तुलना<sub1-42></sub> जोखिम हुआ था.
Protocol
Discussion
जैसा कि ऊपर वर्णित है, oligomeric Aβ की तैयारी में कई समस्याओं अछूता LTP में परिणाम कर सकते हैं. एक ही रास्ता करने के लिए मूल्यांकन कि Aβ गिरावट या Aβ oligomerization की कमी हुई हो सकती है है Aβ Tris Tricine PAGE / पश्चिमी सोख्ता विश्लेषण और…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम स्नायविक विकारों और स्ट्रोक के NIH राष्ट्रीय संस्थान (NINDS) (NS049442) द्वारा समर्थित किया गया.>
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Aβ 1-42 (lyophilized) | American Peptide Co. | 62-0-80 | ||
| 1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP) | Fluka | 52517 | ||
| Dimethylsulfoxide (DMSO) | Biotium | 90082 | ||
| 50mL Polypropylene Centrifuge Tubes | Corning | 05-538-67 | ||
| 1.5ml MaxyClear microtubes Maximum recovery | Axygen | MCT-150-L-C | ||
| Phosphate-Buffered Saline pH 7.4 | Invitrogen-Gibco | 10010-023 | ||
| GASTIGHT Syringes 250 μL | Hamilton | 1725 | ||
| Bath sonicator | Branson | 3510 | ||
| Savant SpeedVac Concentrator System | Various distributors | SC 110A |
Referências
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