Ett inslag i Alzheimers sjukdom är den förhöjning av A-beta<sub> 1-42</sub> Peptid. Här ger vi ett protokoll för att förbereda syntetiska A-beta<sub> 1-42</sub> Oligomerer, vilket försämrar hippocampus långsiktig potentiering, ett cellulärt korrelera minne. Detta förfarande är användbart för att undersöka mekanismerna för A-beta-inducerad patologisk förändring och drog screening.
Abstract
Nedskrivningar av synapsförbindelser sannolikt ligger bakom de subtila amnesic förändringar som skett i ett tidigt skede av Alzheimers sjukdom (AD). β-amyloid (A-beta), en peptid som produceras i stora mängder i AD, är känt för att minska långsiktig potentiering (LTP), en cellulär korrelera för inlärning och minne. Faktum är LTP orsakats av A-beta ett användbart experimentell paradigm för att studera synaptisk dysfunktioner i AD modeller och för screening läkemedel som kan mildra eller återgå sådant synaptic nedskrivningar. Studier har visat att A-beta producerar LTP störningar företrädesvis via sin oligomeric form. Här har vi en detaljerad protokoll för att försämra LTP av perfusion av oligomerized syntetiska Aβ1-42 peptid på akut hippocampus skivor. I denna video, disposition vi en steg-för-steg förfarande för beredning av oligomeric A-beta<sub> 1-42</sub>. Sedan följer vi ett individuellt experiment där LTP minskar i hippocampus skivor utsätts för oligomerized A-beta<sub> 1-42</sub> Jämfört med skivor i ett kontrollrum experiment där ingen A-beta<sub> 1-42</sub> Exponering hade inträffat.
Protocol
Resuspending β-amyloid peptiden Innan du börjar ha klart: A-beta 1-42 (frystorkat pulver) 1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-propanol (HFIP) Låg-bindande polypropylen mikrocentrifugrör (1,5 ml) Gastäta Hamilton spruta med Teflon störtar stop (250 l) Dimetylsulfoxid (DMSO) Låt frystorkat A-beta 1-42 utjämna till rumstemperatur i 30 minuter för att undvika kondens när du öppnar peptiden flaskan. <…
Discussion
Som beskrivits ovan kan flera problem i beredningen av oligomeric A-beta leder felfri LTP. Ett sätt att utvärdera om A-beta nedbrytning eller brist på A-beta oligomerisering kan ha uppstått är att utvärdera A-beta-preparatet hjälp av tris-Tricine SIDA / Western blotting analys och analytisk ultracentrifugering (som inte beskrivs i detta protokoll). När Western blotting provföremålen i non-denaturing/non-reducing villkor, bör en lyckad förberedelse generera en Western blotting signatur med banden som motsvara…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Detta arbete stöddes av NIH National Institute of neurologiska sjukdomar och stroke (NINDS) (NS049442).>
Fa, M., Orozco, I. J., Francis, Y. I., Saeed, F., Gong, Y., Arancio, O. Preparation of Oligomeric β-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices. J. Vis. Exp. (41), e1884, doi:10.3791/1884 (2010).