Summary

磁気変調バイオセンシングシステムを用いた生物学的アッセイの迅速な均質な検出

Published: June 13, 2010
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Summary

磁気変調バイオセンシングシステムを迅速に、敏感にそして単純にそのようなDNA分子やタンパク質などの生物学的アッセイを、検出するために利用されている。

Abstract

磁気変調バイオセンシングシステム(MMB)[1,2]は、急速かつ均一にいかなる洗浄または分離工程を行うことなく、低濃度で生物学的標的を検出する。 IL – 8ターゲットが存在していたときに、"sandwich'ベースのアッセイは、IL – 8ターゲットとビオチン化IL – 8抗体を介して結合蛍光タンパク質をストレプトアビジンに、IL – 8のキャプチャー抗体と磁気ビーズを装着。磁気ビーズは、2つの電磁極を介して交流磁場勾配を印加することにより振動運動に操縦されています。直交するレーザビームの内と外蛍光磁性ビーズに結合されているタンパク質、検出領域に凝縮され、その動きは、同期検波を使用して復調される周期的な蛍光シグナルを生成します。磁気変調バイオセンシングシステムは、以前は次の相補的DNA(cDNA)[2]非構造茨城ウイルスタンパク質3(NS3)のコード配列を検出するために使用されていました。粒子の外部操作や結露のためにこの作品で実証されている技術は、他のアプリケーション、磁気的に結合された薬物の例:配送のために使用することができます<em>生体内</em>またはコントラストを向上<em>生体内</em>画像処理アプリケーション。

Protocol

IL – 8アッセイ: 反応混合物は、それぞれの濃度でアッセイバッファー100μlの最終容量に次の4つのコンポーネントが含まれています。 100ビーズ/μlの最終濃度が、1nano-gram/μl最終濃度ビオチン化IL – 8抗体を2μl、20nano-gram/μl最終濃度でストレプトアビジン蛍光タンパク質を1μl、で捕捉抗体と磁気ビーズを10μlの0.48pico-gram/μlにおけるIL – 8ターゲットのと1μL。コンポーネントは、アッセイ?…

Discussion

要約すると、我々は、MMBのシステムが低濃度(0.5ピコ- gramのは[3,4]バイオプレックスプレシジョンプロサイトカインアッセイの検出限界である)でIL – 8ターゲットの存在を検出するために使用できることを示した。システムの能力は、IL – 8に限定されず、他のタンパク質を検出するために使用することができます。 MMBシステムの利点は、急速に、任意の分離または洗浄工程なしでターゲット?…

Acknowledgements

本研究の一部はIshayaホロヴィッツ基金によってサポートされていました。

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
Bio-Plex Pro Human Cytokine IL-8 set   Bio-Rad 171-B5008M  
Recombinant human IL-8 target   Thermo Scientific R202625  
Biotinylated monoclonal mouse anti human IL-8 antibody G265-8   BD Biosciences 554718  
Streptavidin coupled fluorescent protein   Bio-Rad Streptavidin PE  

Referências

  1. Danielli, A., Arie, A., Porat, N., Ehrlich, M. Detection of fluorescent-labeled probes at sub-picomolar concentrations by magnetic modulation. Optics Express. 16, 19253-19259 (2008).
  2. Danielli, A., Porat, N., Arie, A., Ehrlich, M. Rapid homogenous detection of the Ibaraki virus NS3 cDNA at pico-molar concentrations by magnetic modulation. Biosensors and Bioelectronics. 25, 858-863 (2009).
  3. . . Bio-Rad “Human angiogenesis assay panel”. , .
  4. . Instruction Manual. Bio-Plex Precision Pro Cytokine Assay. , .
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Citar este artigo
Danielli, A., Porat, N., Ehrlich, M., Arie, A. Rapid Homogeneous Detection of Biological Assays Using Magnetic Modulation Biosensing System. J. Vis. Exp. (40), e1935, doi:10.3791/1935 (2010).

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