メダカとゼブラフィッシュは、脊椎動物のゲノム機能の遺伝的解剖のための補完的です。このプロトコルは、メダカ胚に成功したマイクロインジェクション、実験室でのメダカとゼブラフィッシュを用いた発生学と遺伝学的解析のための重要な手法のためのキーポイントを強調しています。
このビデオでは、我々は1細胞期のメダカ胚にマイクロインジェクションの技術を実証する。メダカは、遺伝子と発生学の両方の分析を可能にし、ゲノムワイドな表現型主導型の変異画面はゼブラフィッシュとマウスのように、1アウト実施された脊椎動物のモデル生物の一つである小規模な産卵淡水魚です。メダカとゼブラフィッシュの間に関連する遺伝子の機能重複の発散は、単一の種2の識別不能な新規な表現型の同定を可能にする、このようにメダカとゼブラフィッシュは、脊椎動物のゲノム機能の遺伝的解剖のために補完的である。
胚透明であり、外部からの開発メダカを利用するには、マイクロインジェクションは、作るための過剰発現やノックダウン、目的の遺伝子、およびDNAのラベリング細胞のmRNAまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドのためにセルトレーサーを注入するために必要不可欠な技術です。トランスジェニック系統。
このビデオでは、我々は1細胞期のメダカ胚に細胞トレーサー、mRNAは、DNAまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドを注入する方法を示しています。このテクニックは、私たちはリアルタイムで、生体内で様々な発生過程を研究することができました。それはaffordsこのプロセスとそれに続く詳細な分析が大幅に脊椎動物の器官形成と基礎細胞生物学の我々の理解を高めるために可能性を秘めている。そのような知識はために重要である、と再生医療の治療用途をもたらす可能性があります。
この作品は、MRCからの助成金によって支えられて。
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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4″ fine net | Tools | J & K Aquatics Ltd. | MD001 | Used to capture fish during egg harvesting. |
Embryo medium | Reagent | Made in-house | 200ml 50X stock solution, 1ml 1%methyleneblue in H2O/10 liter RO water (50X stock solution: NaCl 14.7g, KCl 0.6g, CaCl2 2H2O 2.4g, MgSO4 7H2O 4.0g/1 litre RO water. | |
Fine waterproof sandpaper – p2000 grit size | Tools | Hermes Abrasives Ltd. | Very fine grit size for rolling/cleaning embryos with chorions. | |
Borosilicate glass capillaries | Tool | Harvard Apparatus | GC100-10F | For making microinjection needles. |
Micropipette puller | Equipment | Narishige scientific instrument lab | Model PP-830 | For making microinjection needles. |
Eppendorf microloader | Tool | Eppendorf | 5242956.003 | For loading microinjection needles. |
Microinjector apparatus | Equipment | Eppendorf | Model 5242. | |
Micromanipulator | Equipment | Narishige | Model MN151. | |
Agarose injection plate | Tools | Made in-house | For holding embryos during injection. |