Medaka 및 zebrafish는 척추 게놈 기능의 유전자 해부에 대한 보완하고 있습니다. 이 프로토콜은 medaka의 배아에 성공 microinjection, 실험실에서 medaka와 zebrafish를 사용하여 embryological 및 유전자 분석을위한 중요한 기술에 대한 핵심 포인트를 강조 표시합니다.
이 비디오에서는, 우리는 한 세포 단계의 배아로 medaka microinjection의 기법을 보여줍니다. Medaka는 유전자와 embryological 모두 분석이 가능하고 게놈 차원의 표현형 기반 돌연변이 화면이 zebrafish 및 마우스에서와 같이 1, 실시되었다하는 척추 모델 생물 중 하나입니다 작은 달걀 – 누워있는 민물고기이다. medaka와 zebrafish 사이의 관련 유전자의 기능 중복의 발산 따라서 단일 종 2 medaka 및 zebrafish는 척추 게놈 기능의 유전자 해부에 대한 보완으로 식별할 아르 소설 phenotypes의 신분을 수 있습니다.
배아 투명하고 외부 개발 medaka 생선을 활용하려면, microinjection은 만들기위한 지나친 표현하고 두드리는 다운 관심의 유전자와 DNAs에 대한 상표 세포, mRNAs 또는 방지 감지 oligonucleotides에 대한 휴대 추적기를 삽입하는 필수적인 기술이다 형질 라인.
이 비디오에서는, 우리는 한 세포 단계의 배아로 medaka 셀 추적, mRNA, DNA 또는 방지 감지 oligonucleotide 주입하는 방법을 보여줍니다. 이 기술은 우리가 실시간으로 인 – 생체내 다양한 발달 과정을 공부하고있었습니다. 그것이 내실수이 과정과 이후의 상세한 분석은 크게 척추 organogenesis 및 기본 세포 생물학 우리의 이해를 향상시킬 가능성이있다. 이러한 지식에 대한 중요한, 그리고 재생 의학의 치료 응용 프로그램을 얻을 수 있습니다.
이 작품은 MRC에서 교부금에 의해 지원되었다.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
4″ fine net | Tools | J & K Aquatics Ltd. | MD001 | Used to capture fish during egg harvesting. |
Embryo medium | Reagent | Made in-house | 200ml 50X stock solution, 1ml 1%methyleneblue in H2O/10 liter RO water (50X stock solution: NaCl 14.7g, KCl 0.6g, CaCl2 2H2O 2.4g, MgSO4 7H2O 4.0g/1 litre RO water. | |
Fine waterproof sandpaper – p2000 grit size | Tools | Hermes Abrasives Ltd. | Very fine grit size for rolling/cleaning embryos with chorions. | |
Borosilicate glass capillaries | Tool | Harvard Apparatus | GC100-10F | For making microinjection needles. |
Micropipette puller | Equipment | Narishige scientific instrument lab | Model PP-830 | For making microinjection needles. |
Eppendorf microloader | Tool | Eppendorf | 5242956.003 | For loading microinjection needles. |
Microinjector apparatus | Equipment | Eppendorf | Model 5242. | |
Micromanipulator | Equipment | Narishige | Model MN151. | |
Agarose injection plate | Tools | Made in-house | For holding embryos during injection. |