جدران البطين الجانبي تحتوي على أكبر منطقة جرثومي في دماغ الثدييات الكبار. تقليديا ، وقد اعتمدت الدراسات على تكوين الخلايا العصبية في هذه المنطقة على التقنيات الكلاسيكية للتحليل النسيجي sectioning. هنا نقدم نهجا بديلا ، والتقنية wholemount ، الذي يوفر شاملة ، ان وجه نظرا لهذه المنطقة جرثومي.
جدران البطينين الجانبية تحتوي على أكبر منطقة جرثومي في دماغ الثدييات الكبار. منطقة subventricular (SVZ) في هذه الجدران هي نظام نموذجي درس على نطاق واسع لفهم سلوك الخلايا الجذعية العصبية وتنظيم الخلايا العصبية الكبار. تقليديا ، وقد اعتمدت هذه الدراسات على التقنيات الكلاسيكية للتحليل النسيجي sectioning. هنا نقدم نهجا بديلا ، والتقنية wholemount ، الذي يوفر شاملة ، ان وجه نظرا لهذه المنطقة جرثومي. مقارنة المقاطع ، wholemounts الحفاظ على علاقات كاملة والتهندس الخلوي الخلوي داخل SVZ. وقد كشفت مؤخرا ان هذا النهج الكبار الخلايا الجذعية العصبية ، أو خلايا B1 اكتب ، هي جزء من خلايا الظهارة العصبية مختلطة مع بطانة البطانة العصبية متباينة البطينين الجانبية. بالإضافة إلى ذلك ، تم استخدام هذا النهج لدراسة الاستقطاب مستو من الخلايا البطانة العصبية وتدفق السائل النخاعي أنها تولد في البطين. مع أدلة حديثة أن الخلايا الجذعية العصبية الكبار هم من السكان غير المتجانسة الذي تم تحديده على الصعيد الإقليمي ، فإن النهج wholemount من المرجح أن تكون أداة أساسية لفهم تنظيم وparcellation هذه الخلية الجذعية المتخصصة.
وقد اعتمدت معظم الدراسات من الخلايا العصبية في مناطق البطين وsubventricular على تقنيات الكلاسيكية لدراسة sectioning microanatomy الخلوية والعلاقات في هذه المناطق. نحن هنا وصف أسلوب بديل ، استخدم لأول مرة لتحليل شبكة من السلاسل المهاجرة neuroblasts المتولدة في SVZ 1 ، ثم استخدمت لدراسة تجديد السكان السلف SVZ التالية المضادة للعلاج الإنقسامية 6 ، والتي تم استخدامها مؤخرا لدراسة دقيقة قمية والخلايا القاعدية خلايا تفاعلات الكبار الخلايا الجذعية العصبية SVZ 2،3،4. ومن المثير للاهتمام ، فقد كشفت هذه التقنية أن الخلايا الجذعية العصبية ، أو خلايا B1 ، اكتب من SVZ الكبار هي جزء من خلايا الظهارة العصبية مختلطة مع تقسيم غير متمايزة البطانة العصبية. وقد أظهرت ان وجه التصوير باستخدام wholemounts أن هذه الظهارة العصبية وهندسة الدولاب على الهواء مختلطة تتألف من النهايات قمية من الخلايا B1 اكتب محاطة السطوح قمية كبيرة من خلايا البطانة العصبية 4. وأوضح ان هذا التحليل وجه فهمنا من سلالة من الخلايا الجذعية العصبية في أدمغة الأجنة والبالغين على أنها تتكون من خلايا ذات النهايات قمية على سطح البطين وعمليات الاتصال القاعدية مكانة الأوعية الدموية. كان من المستحيل تقريبا هذه النتائج باستخدام تقنيات sectioning الكلاسيكية. Wholemounts تسهل أيضا تحديد الخلايا الجذعية العصبية عبر عملية الاتصال بهم ، البطين القمي. كما تم العثور على علامات أكثر تحديدا لهذه الخلايا الجذعية ، وسوف wholemounts تكون جزءا لا يتجزأ من تحديد وتحليل سلوك الخلايا الجذعية العصبية.
Wholemounts من جدران البطين الجانبي أيضا تقديم وجهة نظر مثالية لدراسة الاستقطاب مستو من خلايا البطانة العصبية. خلايا البطانة العصبية هي خلايا بطانة multiciliated البطينين التي تعمل لدفع CSF بطريقة منسقة. مع تقنية wholemount ، يتعرض للظهارة كامل البطانة العصبية ان وجه ويمكن الملون ودراستها بشكل شامل من الأمامي إلى الخلفي حدود بطني وظهري ل. علاوة على ذلك ، تدفق المقايسات البطانة العصبية التي أجريت على تشريح حاد ، wholemounts يعيش تثبت بقوة تدفق مستو الاستقطاب التي تم إنشاؤها بواسطة أهداب البطانة العصبية. وقد كشفت مؤخرا باستخدام نهج العمل wholemount المحددات الخلوية من هذه الاقطاب مستو البطانة العصبية 5. ومن المثير للاهتمام ، واقترحت دراسات wholemount أيضا أن البطانة العصبية ولدت CSF تدفق يؤسس التدرجات chemorepellents التي توجه من هجرة الشباب في الخلايا العصبية SVZ 7. النهوج التي حددت في البداية Wholemount شبكة سلاسل العصبية المهاجرة مستمرة ولذلك لتوفير نظرة ثاقبة الآليات التي تنظم الهجرة السلسلة.
تحليل VZ وSVZ بواسطة التصوير wholemount يضيف أسلوبا جديدا للدراسات المستقبلية على حد سواء وسيلة لتوضيح فهمنا من الدراسات الموجودة. على سبيل المثال ، اقترحت دراسة حديثة أن الخلايا الجذعية العصبية في SVZ الكبار كانوا CD133 + / CD24 خلايا في اتصال مع ال 8 البطين. استنادا immunostaining في الفروع ، وادعى هؤلاء الكتاب أن هذه الخلايا كانت خلايا البطانة العصبية subpopulation multiciliated. ومع ذلك ، في دراستنا باستخدام النهج wholemount ، الذي يعطي نظرة أكثر شمولا من الظهارة والبطانة العصبية كله ، وجدنا أن جميع خلايا البطانة العصبية التعبير عن CD24 والوحيد البطين – الاتصال الخلايا التي تم CD133 + / CD24 – كانت مجموعة فرعية من B1 اكتب 4 خلايا. وعلاوة على ذلك ، فإن تقنية wholemount وعود ليكون من المفيد النظر في الدراسات المستقبلية للمنظمة الفسيفساء وصف مؤخرا من الخلايا الجذعية العصبية في المخ البالغ 9. وقد أظهرت عدة دراسات أن الخلايا الجذعية العصبية في الدماغ لدى البالغين ليست متجانسة من السكان ، ولكن يتم تحديد إقليميا وتنتج عادة فرعية معينة فقط من interneurons البصلة الشمية. وقد اقترحت هذه الدراسات التي قد تكون حاليا مجموعات سكانية فرعية مختلفة من الخلايا الجذعية العصبية إما عن طريق التعبير عن عوامل النسخ 10،11،12،13،14 محددة و / أو عن طريق التوطين على المستوى الإقليمي على امتداد نطاقات الظهري الأمامي والخلفي بطني والعشرين لل جدار جانبي 9،15،16. كما يتم تحديد العلامات الجزيئية للمزيد من مجموعات سكانية فرعية محددة إقليميا الكبار الخلايا الجذعية العصبية ، وينبغي أن التصوير wholemount توفير رؤية شاملة للparcelation السلف من هذه المجالات المختلفة على طول الجدار البطيني.
ويمكن أيضا تشريح wholemount وتقنيات التصوير المقدمة هنا يمكن استخدامها لتحليل جدران البطين في الجنين. يتم إجراء تشريح للجدار الجانبي الجنينية ، خطوة بخطوة ، وذلك بالطريقة نفسها. هناك اختلافات طفيفة في مستوى الصعوبة ، والبطينين الجنينية هي أكبر نسبيا مما يجعل تشريح أسهل ، ولكن ليونة الأنسجة مما يجعل التلاعب أكثر صعوبة. على وجه الخصوص ، يمكن استخدام التعرض مماثلة للبطين الوحشي في جنينالسراج لتشريح الجدار القشرية من البطين لدراسة الخلايا العصبية القشرية. الأدلة الأخيرة تشير إلى أن الإرث غير المتماثلة الجسيم المركزي يحافظ الدبقية شعاعي على سطح الخلايا العصبية خلال البطين القشرية 17. EN قد وجه التصوير الشعاعي من السطوح قمية الدبقية تقديم رؤى في كيفية موروثة غير متماثلة centrosomes داخل هذه الخلايا الانقسام.
كما هو الحال مع معظم التقنيات ، لا سيما تلك التي تنطوي على مهارة دقيقة ، ويتطلب ممارسة السيادة. هناك ، ومع ذلك ، فإن بعض العناصر في التشريح التي هي مفتاح لأفضل النتائج : 1) ضبط الإضاءة إضاءة العينة لخلق الظلال ويوفر على النقيض لا تقدر بثمن أثناء تشريح الأنسجة التي هي على خلاف ذلك متجانسة نسبيا ، 2) استخدام مثل ملقط يتم استخدامها أبدا اثنين من المسامير الحشرات الملقط في هذا الأسلوب لقرصة معا أو التقاط الأنسجة ، ولكن يتم استخدام الدبابيس والمناورة التي يمكن إعادة تعديل باستمرار لتحقيق الاستقرار في الأنسجة أثناء القص و3) توازن في تراجع لطيف وقطع السكين لا ينبغي إلا أن تستخدم لخفض بل أيضا لتوفير تراجع لطيف لفصل الجدران الإنسي والجانبية ، وتذكر أن تتم في الواقع معظم هذا التراجع من خلال تشريح لطيف مع قطع فقط على فترات متقطعة.
العمل بدعم من منحة المعاهد الوطنية للصحة HD – 32116 ، ودعم مؤسسة الأسرة ساندلر ، والخلية الجذعية الصندوق جون باوز ، وزارة التربية ، MHLW وHFSP. ZM بدعم من مؤسسة Baldoceda كارلوس وUCSF زمالة Krevans. AA – B. يحمل هيذر وميلاني مدارس مانشستر يونايتد الرئيس هبوا.