חתך דק של ההכנות פורסים עבור אימונוהיסטוכימיה
Summary
השיטה הנוכחית מאפשרת cryostat לשחזור של חתך, קשה לניהול, חתיכות קטנות רקמות, כגון ביופסיה, פרוסות המוח. אנו מנצלים אלומיניום פשוט מקפיא הבמה כדי להקל על הטיפול רקמות cryostat רגיל שגרתי לייצר חלקים 5-10 מיקרון סדרתי של פרוסות 400 מיקרון עבה המוח.
Abstract
חקירות רבות במדעי המוח, כמו גם מתחומים אחרים, לערב לימוד קטנות, אך חלקים מאקרוסקופיים או חלקים של רקמת שנשתמרו, הסיר טרי, או נכרת, אבל המשיכה קיימא, כמו פרוסת ההכנות של רקמת המוח. מחקרים מאוחרים יותר מיקרוסקופיים של חומר זה יכול להיות מאתגר, כמו דגימות רקמה עלול להיות קשה להתמודד. הפגינו כאן היא שיטה לקבלת סעיפים cryostat דקה של רקמה בעובי זה עשוי לנוע בין 0.2-5.0 מ"מ. אנו שגרתי לחתוך עבה 400 מיקרון Vibratome פרוסות המוח סדרתי לתוך סעיפים 5-10 מיקרון העטרה cryostat. פרוסות הם בדרך כלל בשימוש הראשון של הניסויים electrophysiology ואז דורשים ניתוח מיקרוסקופי של cytoarchitecture של האזור שממנו הקלטות נצפו. אנחנו צריכים לבנות מכשיר פשוט המאפשר הכנה מבוקרת לשחזור והמיקום של הפרוסה רקמות. מכשיר זה מורכב 5 ס"מ אורך גליל בקוטר של 1.2 ס"מ, המשמש כבמה הקפאת עבור הפרוסה. טבעת הדוקה שקופיות על קירות מתן גליל סביב פרוסה המאפשר את הרקמה להיות שקוע בתוך מתחם הקפאה (למשל, אוקטובר). זהו אז קפוא במהירות עם קרח יבש כתוש רקיק וכתוצאה מכך יכול להיות בעמדה בקלות חתך cryostat. סעיפים Thin ניתן להפשיר רכוב על גבי שקופיות מצופה לאפשר מחקרים נוספים שיש לבצע, כגון שיטות צביעה שונים, הכלאה באתרו, או אימונוהיסטוכימיה, כפי שהודגם כאן.
Protocol
Discussion
הפרוטוקול המובא כאן מספק החוקרים עם תמציתי, קל לעקוב אחר קווי המתאר של כיצד להשיג חלקים cryostat דקה, קשה לניהול, חתיכות קטנות רקמות, כגון ביופסיה, פרוסות המוח למחקרים נוספים להתבצע, כגון מכתים שיטות שונות, הכלאה באתרו, או אימונוהיסטוכימיה.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| O. C. T. | Ted Pella, Inc | 27050 | ||
| Glycerol Solution | 30% Glycerol Solution in PBS w/v | |||
| Sucrose Solution | 30% Sucrose Solution in PBS w/v |
Referências
- Scoutern, C. W., O’Connor, R., Cunningham, M. Perfusion fixation of research animals. Microsc. Today. 14, 26-33 (2006).
- Cunningham, M. G., Connor, C. M., Zhang, K., Benes, F. M. Diminished serotonergic innervation of adult medial prefrontal cortex after 6-OHDA lesions in the newborn rat. Brain Res. Dev. Brain Res. 157, 124-131 (2005).
