प्रयोगात्मक मेटास्टेसिस परख
Summary
यह लेख एक प्रयोगात्मक मेटास्टेसिस परख है कि मानव कैंसर कोशिका लाइनों के metastatic क्षमता का निर्धारण करने के लिए प्रयोग किया जाता है की प्रक्रिया का वर्णन करता है.
Abstract
मेटास्टेसिस कैंसर रोगियों में मौत का प्रमुख कारण है. मेटास्टेसिस के तंत्र को समझने के लिए, एक प्रयोगात्मक मेटास्टेसिस परख immunodeficient चूहों का उपयोग कर स्थापित किया गया था. यह आलेख इस परख में शामिल नमूना तैयार करने, अंतःशिरा इंजेक्शन, और फेफड़ों metastases के संवर्धन की कोशिकाओं सहित प्रक्रियाओं, रूपरेखा बनाती है. संक्षेप में, मानव कैंसर की कोशिकाओं के एक पूर्व निर्धारित संख्या के लिए तैयार थे<em> इन विट्रो में</em> और सीधे अपनी पूंछ नसों के माध्यम से immunodeficient चूहों के संचलन में अंतःक्षिप्त. कक्षों की एक छोटी संख्या संचलन में अशांति जीवित है और फेफड़ों जैसे आंतरिक अंगों में metastases के रूप में विकसित. चूहों अंतःक्षिप्त एक निश्चित अवधि के बाद विच्छेदित कर रहे हैं. metastases के ऊतक वितरण विदारक माइक्रोस्कोप के तहत निर्धारित किया जाता है. एक विशिष्ट ऊतकों में metastases के संख्या में गिना है और यह सीधे इंजेक्शन कैंसर की कोशिकाओं के metastatic क्षमता के साथ संबद्ध है. उत्पन्न metastases के अलग और सुसंस्कृत हैं<em> इन विट्रो में</em> के रूप में सेल लाइनों, जो अक्सर माता – पिता की लाइन से बढ़ाया metastatic क्षमता दिखाने के लिए जब immunodeficient चूहों में फिर इंजेक्शन. ये अत्यधिक metastatic डेरिवेटिव जीन या आणविक मार्ग है कि metastatic प्रगति को विनियमित करने की पहचान के लिए उपयोगी उपकरण बन जाते हैं.
Protocol
Discussion
मेटास्टेसिस कैंसर रोगियों में मौत का प्रमुख कारण है. उनके प्राथमिक loci, परिसंचरण में उनके प्रवेश (intravasation), परिसंचरण (extravasation) से उनके बाहर निकलने, और अस्तित्व और एक दूर के अंग में वृद्धि से कैंसर की कोशिकाओं की …
Acknowledgements
इस प्रोटोकॉल का परीक्षण किया गया था और डॉ. रिचर्ड Hynes (एमआईटी) की प्रयोगशाला में शुरू अनुकूलित. अनुदान NYSTEM आईडिया पुरस्कार (LX के लिए) और रुथ एल Kirschstein राष्ट्रीय अनुसंधान सेवा पुरस्कार (LX के लिए) द्वारा प्रदान की गई है.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 10313-021 | ||
| FBS | Hyclone | SH30088.03 | ||
| HBSS | Invitrogen | 14175-095 | ||
| NaCl | Sigma-Aldrich | S9888 | ||
| KCl | Mallinckrodt Chemicals | 6838-04 | ||
| Na2 HPO4.7H2O | Mallinckrodt Chemicals | 7896-04 | ||
| KH2PO4 | Mallinckrodt Chemicals | 7100-12 | ||
| Phenol red | Sigma-Aldrich | P3532 | ||
| EDTA-Na | EMD Biosciences | 4010 | ||
| Trypan Blue | Invitrogen | 15250-061 | ||
| Trypsin 2.5% | Invitrogen | 15090-046 | ||
| Ethanol | Ultrapure | 200-CSGP | ||
| 50 ml Falcon Tube | VWR | 89039-656 | ||
| Microcentrifuge Tubes | Axygen Scientific | MCT-175-C | ||
| Falcon 70µm Cell Strainer | BD Biosciences | 352350 | ||
| 5ml Falcon Culture Tube | VWR | 60818-576 | ||
| Hemacytometer | Hausser Scientific | 15170-208 | ||
| 1 ml syringe | BD Biosciences | 329650 | ||
| 30 ½ gauge needle | BD Biosciences | 305106 | ||
| Mouse restrainer | Plas Labs Inc. | 551-BSRR | ||
| Surgical scissors | Fisher Scientific | 08-940 | ||
| Forceps | Fisher Scientific | 08-902 | ||
| Dissecting Microscope | Nikon | SMZ1500 | ||
| Benchtop Centrifuge | Thermoscientific | 75003491 |
Referências
- Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
- Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis reveals an essential role for RhoC. Nature. 406 (6795), 532-532 (2000).
- Xu, L., Begum, S., Hearn, J. D., Hynes, R. O. GPR56, an atypical G protein-coupled receptor, binds tissue transglutaminase, TG2, and inhibits melanoma tumor growth and metastasis. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (24), 9023-9023 (2006).
- Kozlowski, J. M., Hart, I. R., Fidler, I. J., Hanna, N. A human melanoma line heterogeneous with respect to metastatic capacity in athymic nude mice. J Natl Cancer Inst. 72 (4), 913-913 (1984).
- Kang, Y. A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone. Cancer Cell. 3 (6), 537-537 (2003).
