En este artículo se ilustra el método de inmersión floral de<em> Agrobacterium tumefaciens</em> La transformación mediada de<em> Arabidopsis thaliana</em>. Mediante la introducción de un ciclo celular regulados promotor-reportero,<em> PTSO2:: β-glucuronidasa (GUS)</em>, En<em> Arabidopsis</em>, Que ilustra cómo se detecta la expresión de GUS en plantas transgénicas reportero.
Abstract
La capacidad de introducir genes extraños en un organismo es la base de la biología moderna y la biotecnología. En el modelo de planta de flores<em> Arabidopsis thaliana</em>, El floral dip transformación del método<sup> 2.1</sup> Ha sustituido a todos los métodos anteriores, debido a su simplicidad, eficiencia y bajo costo. En concreto, los brotes jóvenes de la floración<em> Arabidopsis</emPlantas> se sumergen en una solución de<em> Agrobacterium tumefaciens</em> La realización específica construcciones de plásmidos. Después de la inmersión, las plantas se volvió a su normal crecimiento y rendimiento de semillas, un pequeño porcentaje de los cuales son transformados con el gen extraño y pueden ser seleccionados para el medio con antibióticos. Este método de inmersión floral facilitado considerablemente<em> Arabidopsis</em> Investigación y contribuyó enormemente a nuestra comprensión de la función de genes de plantas. En este estudio, utilizamos el método de inmersión floral para transformar un gen reportero,<em> Β-glucuronidasa (GUS)</em>, Bajo el control de<em> TSO2</em> Promotor.<em> TSO2</em>, Que codifica para la ribonucleótido reductasa (RNR) subunidad pequeña<sup> 3</sup>, Es un gen ciclo celular está regulado esencial para la biosíntesis de dNDP en la fase S del ciclo celular. El examen de<em> GUS</em> Expresión en plantas transgénicas<em> Arabidopsis</em> Plántulas muestra que<em> TSO2</em> Se expresa en los tejidos se dividen activamente. El método experimental reportado y los materiales pueden ser fácilmente adaptados no sólo a la investigación sino también para la educación en la escuela secundaria y superior.
Protocol
I. floral inmersión en la transformación de Arabidopsis thaliana Aproximadamente un mes antes de la transformación, sembrar las semillas de Arabidopsis en 4-8 botes (5 ollas pulgada cuadrada), con aproximadamente 10-15 plantas por maceta. Para las plantas con fertilidad normal, 4 macetas de plantas por construir el plásmido será suficiente. Si uno tiene que transformar Arabidopsis mutante con reducción de la fertilidad, aumentar el número de macetas en consecuencia. …
Discussion
La eficiencia de transformación está determinada por muchos factores diferentes, que se analizan a continuación:
La salud de las plantas y su edad son de vital importancia. Aproximadamente un mes las plantas produciendo numerosos botones florales inmaduros son ideales. Recorte de los brotes principales para fomentar la formación secundaria días 3-4 disparar antes de la transformación se incrementará la eficiencia de transformación. Las plantas más viejas dará lugar a transformantes, pero a un ritm…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Damos las gracias a Chunxin Wang para la construcción de pTSO2:: GUS y las fotos en la Figura 1, Detlef Weigel para compartir el protocolo de GUS-a prueba de tontos, Sijacic Paja y Hollender Courtney por sus valiosos comentarios. Investigación en el laboratorio Z. L s es apoyado por los EE.UU. National Science Foundation (IOB0616096 y MCB0744752). ZL es parcialmente financiado por la Universidad de Maryland Estación Experimental Agrícola.
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
6-benzyladenine
Sigma
852430
Silwet-77
Crompton Corp.
Toxic, wear gloves
Murashige and Skoog Basal medium (MS)
Sigma
M5519
Gamborg’s vitamin solution 1000X
Sigma
G1019
X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide cyclohexamine salt