Exame da estrutura G-Telomere saliência na Trypanosoma brucei</em
Summary
Os telômeros são essenciais para a estabilidade cromossômica ea estrutura G-saliência dos telômeros é essencial para a telomerase mediada manutenção dos telômeros. Recentemente, aprovou dois métodos para detectar a estrutura G-saliência dos telômeros em<em> Trypanosoma brucei</em>, Que são nativas em gel-hibridação e ligadura mediada por extensão de primer, que serão descritas.
Abstract
O telômero estrutura G-saliência tem sido identificada em eucariotos, incluindo muitos fungos, vertebrados, e Trypanosoma brucei. Serve como substrato para telomerase para a síntese de DNA de novo do telômero e, portanto, importante para a manutenção dos telômeros. T. brucei é um parasita protozoário que causa a doença do sono em humanos e nagana em bovinos. Uma vez infectado hospedeiro mamífero, T. célula brucei regularmente alterna a sua antígeno de superfície para escapar ataque do sistema imunológico do hospedeiro. Temos recentemente demonstraram que o T. brucei estrutura dos telômeros desempenha um papel essencial na regulação da expressão gênica do antígeno de superfície, que é crítico para T. patogênese brucei. No entanto, T. brucei estrutura dos telômeros não tem sido extensivamente estudada devido à limitação de métodos de análise dessa estrutura especializada. Temos agora adotada com sucesso o nativo em gel hibridação e mediada por ligadura métodos cartilha de extensão para exame da estrutura G-saliência dos telômeros e um método de ligadura adaptador para determinação do terminal de nucleotídeos dos telômeros em T. células brucei. Aqui, vamos descrever os protocolos em detalhe e comparar suas vantagens e limitações.
Protocol
Discussion
Trypanosoma brucei causa a doença do sono em humanos. Esta doença, se não tratada, é inevitavelmente fatal. T. células brucei em hospedeiros mamíferos sofrer variação antigênica regularmente, de modo a evitar o ataque imune do hospedeiro 7. Por isso, é muito difícil eliminar a T. células brucei uma vez que uma infecção é estabelecida. Recentemente, demonstrou que os telômeros desempenhar um papel importante na regulação da expressão de T. bru…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gostaríamos de agradecer ao Dr. Carolyn Preço para discussões científicas e sugestões perspicaz. Este trabalho é suportado pelo NIH conceder AI066095 (PI: Bibo Li).
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SeaKem LE Agarose | Lonza | 50004 | ||
| Agarose Type VII (low melting agarose) | Sigma | A4018 | ||
| Proteinase K, recombinant, PCR grade | Roche Diagnostic | 03 115801001 | ||
| Exo I | NEB | M0293 | ||
| Exo T | NEB | M0265 | ||
| T7 exonuclease | NEB | M0263 | ||
| T4 DNA polymerase | NEB | M0203 | ||
| QIAquick nucleotide removal kit | Qiagen | 28304 |
Referências
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