ヘリオス遺伝子銃を用いたタマネギの細胞における蛋白質 - 蛋白質相互作用のための二分子蛍光相補（BiFC）アッセイ
Summary
この記事では、タマネギ表皮細胞にプラスミドDNAを導入する遺伝子銃をヘリオス適切にBioRad社製を使用する方法を示して、どのように二分子蛍光相補性の原理（BiFC）に基づいて、タマネギの細胞におけるタンパク質間相互作用をテストする
Abstract
多様な生物の遺伝子機能の調査では、遺伝子産物が正常な細胞環境の相互作用についての知識に依存しています。二分子蛍光相補（BiFC）アッセイ<sup> 1</sup>研究者は生きた細胞におけるタンパク質間相互作用を可視化することを可能にし、不可欠な研究ツールとなっています。このアッセイは、それぞれの潜在的な相互作用タンパク質のパートナーに融合されている蛍光タンパク質（GFP）の2つのフラグメントの促進関連に基づいています。二つのタンパク質パートナーの相互作用は、蛍光につながる、N末端とGFPのC末端フラグメントの関連付けを容易にするだろう。植物研究者のために、タマネギ表皮細胞が原因タマネギの組織を取得し、準備の容易さと最小のバックグラウンド蛍光と蛍光の直接可視化のBiFCアッセイを実施するための理想的な実験系です。ヘリオス遺伝子銃（バイオラッド）は、一般的にタマネギの細胞にプラスミドDNAを砲撃するために使用されます。私たちは、の使用は対話する2つの用プラスミドコンストラクトを導入する遺伝子銃をヘリオス示す<em>シロイヌナズナ</em>転写因子、スース（SEU）とLEUNIGホモログ（LUH）<sup> 2</sup>とタマネギ表皮細胞でBiFCによって媒介それらの相互作用の可視化。
Protocol
Discussion
- ：GFPまたは35S：：：GUS、初めてユーザーのために、我々は、35Sのような単一のプラスミド構成レポーターで、カートリッジの準備から観察するために、全体の手順を練習することをお勧めします。我々は、35Sを使用：：プラスミドGFPは、博士から入手。スティーブ山と小寧張6（図1A、D）。 RioRad（猫165〜2244）で販売して遺伝子のショットコントロールのカートリッジは、植物には適していませ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々は、博士に感謝する。 35S用のスティーブマウントと小寧張：：GFP pGlowbug構造とHokensen博士フェローシップCH研究にZ. L'の研究室では、米国国立科学財団（IOB0616096とMCB0744752）によってサポートされています。 ZLは部分的にメリーランド州農業試験場の大学によってサポートされています。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Yellow onion | Any supermarket | |||
| Helios Gene Gun | BioRad | |||
| Fluorescent microscope with appropriate filters for GFP or YFP | Zeiss, Nikon, Olympus |
Referências
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