चूहे में अग्नाशय बीटा सेल मास की स्वस्थानी मात्रा में
Summary
निम्न प्रोटोकॉल आभासी टुकड़ा इमेजिंग के लिए अग्नाशय के विच्छेदन की प्रक्रिया की रूपरेखा है, और सभी GFP टैग पूरे अग्न्याशय में बीटा कोशिकाओं के बाद मात्रा का ठहराव है.
Abstract
स्वास्थ्य और रोग में विशेष सेल आबादी के परिवर्तन अनुरेखण जैव चिकित्सा अनुसंधान का एक महत्वपूर्ण लक्ष्य है. निगरानी अग्नाशय बीटा सेल प्रसार और आइलेट विकास की प्रक्रिया विशेष रूप से चुनौतीपूर्ण है. हम प्रतिदीप्ति टैग ImageJ (rsb.info.nih.gov / ij /) के लिए लिखा मैक्रो के साथ बीटा कोशिकाओं के साथ ट्रांसजेनिक चूहों की अक्षुण्ण अग्न्याशय में बीटा कोशिकाओं के वितरण पर कब्जा करने की विधि विकसित किया है. अग्नाशय के विच्छेदन और ऊतक समाशोधन के बाद, पूरे अग्न्याशय एक आभासी टुकड़ा के रूप में कब्जा कर लिया है, जिसके बाद GFP टैग कोशिकाओं बीटा जांच कर रहे हैं. विश्लेषण कुल क्षेत्र बीटा सेल, आइलेट संख्या और प्रत्येक आइलेट के लिए और बीटा कोशिकाओं के छोटे समूहों के लिए विशिष्ट मापदंडों और स्थानों के लिए संदर्भ के साथ आकार वितरण की मात्रा का ठहराव भी शामिल है. islets के पूरे वितरण तीन आयामों में प्लॉट किया जा सकता है, और प्रत्येक आइलेट के आकार और आकार पर वितरण से जानकारी एक नज़र में समग्र क्षेत्र बीटा सेल में परिवर्तन का एक मात्रात्मक और गुणात्मक तुलना की अनुमति देता है.
Protocol
Discussion
और islets बरकरार अग्न्याशय में बीटा सेल समूहों के आभासी स्लाइस छवियों का विश्लेषण islets के पूरे वितरण के एक बड़े पैमाने पर दृश्य प्रदान करता है. विकास और समय पर कुल आइलेट वितरण में परिवर्तन इस प्रकार और अध्यय?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
अध्ययन के द्वारा समर्थित है अमेरिका के सार्वजनिक स्वास्थ्य सेवा डी.के.-081,527 अनुदान, डी.के. – ०,७२,४७३ और शिकागो मधुमेह अनुसंधान और प्रशिक्षण केन्द्र (पशु मॉडल कोर) के विश्वविद्यालय, और Kovler परिवार फाउंडेशन से एक उपहार के लिए डी.के.-+२०,५९५.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Forceps | Miltex | |||
| Scissors | F.S.T | 14001-13 | 01n2 | |
| Scissors | F.S.T | 14072-10 | 02s5 | |
| Large glass slide | Electron Microscopy Sciences | 71862-01 | 75x51x1.2mm | |
| Large cover glass | Ted Pella, Inc | 260462 | 50x75mm | |
| Glass Slide | Fisher Scientific | 12-550-15 | 25x75x1.0mm | |
| Cover glass | Fisher Scientific | 12-458-5M | 75x25mm | |
| Cover glass | Erie Scientific | 25mm circle | ||
| Fluorescent microscope | Olympus IX-81 | |||
| Dissection microscope | Olympus SZX12 | |||
| Stereo Investigator | MicroBrightField | |||
| MIP-GFP mice | Jackson Laboratory |
Referências
- Miller, K., Kim, A., Kilimnik, G., Moka, U., Jo, J., Periwal, V., Hara, M. Islet formation during the neonatal development in mice. PloS One. 4, E7739-E7739 (2009).
- Kilimnik, G., Kim, A., Jo, J., Miller, K., Hara, M. Quantification of pancreatic islet distribution in situ in mice. Am J Physiol Endocrinol Metab. 297, E1331-E1338 (2009).
- Hara, M., Wang, X., Kawamura, T., Bindokas, V. P., Dizon, R. F., Alcoser, S. Y., Magnuson, M. A., Bell, G. I. Transgenic mice with green fluorescent protein-labeled pancreatic beta -cells. Am J Physiol Endocrinol Metab. 284, E177-E183 (2003).
- Hara, M., Dizon, R. F., Glick, B. S., Lee, C. S., Kaestner, K. H., Piston, D. W., Bindokas, V. P. Imaging pancreatic beta-cells in the intact pancreas. Am J Physiol Endocrinol Metab. 290, E1041-E1047 (2006).
