Il protocollo seguente delinea il processo di dissezione del pancreas per l'imaging fetta virtuale, e la successiva quantificazione di tutte le GFP-tagged beta-cellule del pancreas intero.
Abstract
Tracing cambiamenti di popolazioni di cellule specifiche in materia di salute e malattia è un obiettivo importante della ricerca biomedica. Il processo di monitoraggio pancreatiche beta-proliferazione delle cellule e la crescita delle isole è particolarmente impegnativo. Abbiamo sviluppato un metodo per catturare la distribuzione delle beta-cellule del pancreas intatto di topi transgenici con fluorescenza tag beta-cellule con una macro scritta per ImageJ (rsb.info.nih.gov / ij /). In seguito a dissezione del pancreas e di compensazione dei tessuti, il pancreas intero è catturata come una fetta virtuale, dopo di che la GFP-tagged beta-cellule sono esaminati. L'analisi include la quantificazione del totale delle cellule beta zona, il numero di isole pancreatiche e distribuzione delle dimensioni con riferimento a parametri specifici e le posizioni per ogni isola e per piccoli gruppi di beta-cellule. L'intera distribuzione delle isole possono essere tracciati in tre dimensioni, e le informazioni dalla distribuzione delle dimensioni e della forma di ogni isolotto consente un confronto quantitativo e qualitativo dei cambiamenti nella complessiva delle cellule beta zona a colpo d'occhio.
Protocol
Parte 1: Preparazione dei campioni Posizionare il mouse al microscopio dissezione, rimuovere l'intero pancreas con il duodeno e la milza ancora attaccato, e posizionare gli organi su un vetrino pre-pesati. Rimuovere il duodeno, tagliando il suo tessuto connettivo lungo il lato dove è legato al pancreas. Tagliare e rimuovere il grasso in eccesso milza e il pancreas fino a quando il pancreas è completamente isolato nella diapositiva. (Grasso del pancreas è riconoscibile per il colore bianco, come differe…
Discussion
L'analisi delle immagini fetta virtuale di isole e cellule beta nel pancreas cluster intatto offre una grande vista l'intera distribuzione delle isolette. Sviluppi e cambiamenti nella distribuzione delle isole totale nel corso del tempo può quindi essere studiati e confrontati. Un esempio è dimostrato nella nostra analisi della formazione di isole pancreatiche (1). Un analisi completa delle neonatale pancreas topi in vari momenti (P1-P21) ha dimostrato che le isole sono formate da fissione. Mentre il beta-prol…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Lo studio è supportato da US Public Health Service Concessione DK-081527, 072473 e DK-DK-20595 per l'Università di Chicago Diabetes Centro di Ricerca e Formazione (Animal Models core), e un dono da parte della Fondazione Famiglia Kovler.