El protocolo siguiente se describe el proceso de disección del páncreas para obtener imágenes de corte virtual, y la posterior cuantificación de todas las buenas prácticas agrarias de etiquetado de las células beta en el páncreas.
Abstract
Seguimiento de los cambios de las poblaciones de células específicas en materia de salud y la enfermedad es un objetivo importante de la investigación biomédica. El proceso de monitoreo de páncreas de las células beta del islote proliferación y el crecimiento es particularmente difícil. Hemos desarrollado un método para capturar la distribución de las células beta en el páncreas intacto de ratones transgénicos con fluorescencia marcado las células beta con una macro escrita para ImageJ (rsb.info.nih.gov / ij /). Después de la disección del páncreas y la limpieza de tejidos, todo el páncreas se captura como una rebanada virtual, después de que la GFP-etiquetados células beta son examinados. El análisis incluye la cuantificación del total de las células beta del islote número de área, y distribución de tamaño con respecto a los parámetros y lugares específicos para cada islote y para pequeños grupos de células beta. Toda la distribución de los islotes se pueden trazar en tres dimensiones, y la información de la distribución del tamaño y la forma de cada islote permite una comparación cuantitativa y cualitativa de los cambios en el total de superficie de las células beta de un vistazo.
Protocol
Parte 1: Preparación de Muestras Coloque un ratón bajo un microscopio de disección, extirpar el páncreas completo junto con el duodeno y el bazo están todavía atadas, y colocar los órganos en una placa de vidrio previamente pesado. Quitar el duodeno mediante la reducción de su tejido conectivo en el lado donde se une con el páncreas. Cortar y extirpar el bazo y el exceso de grasa en el páncreas hasta que el páncreas está completamente aislado en la diapositiva. (Grasa de páncreas se distingue por…
Discussion
El análisis de las imágenes rebanada virtual de los islotes y las agrupaciones de las células beta en el páncreas intacto proporciona una visión a gran escala de toda la distribución de los islotes. Evolución y los cambios en la distribución de los islotes total en el tiempo por lo tanto pueden ser estudiados y comparados. Un ejemplo se demuestra en el análisis de la formación de los islotes pancreáticos (1). Un análisis completo de páncreas ratones recién nacidos en distintos momentos (P1-P21) ha demostra…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
El estudio está respaldado por EE.UU. Servicio de Salud Pública de subvención DK-081527, 072473-DK y DK-20595 de la Universidad de Chicago Diabetes Research and Training Center (Animal principales modelos), y un regalo de la Fundación de la Familia Kovler.