Farelerde, pankreatik beta-hücre Kütle yerinde Niceleme
Summary
Sanal kesit görüntüleme için aşağıdaki protokol pankreas diseksiyonu sürecini özetliyor ve sonraki tüm pankreas tüm GFP etiketli beta-hücrelerinin kantifikasyon.
Abstract
Sağlık ve hastalık belirli hücre popülasyonlarının değişiklikler İzleme biyomedikal araştırmanın önemli bir hedeftir. Izleme pankreatik beta hücre proliferasyonu ve adacık büyüme süreci, özellikle zor. Biz ImageJ (rsb.info.nih.gov / ij /) için yazılmış bir makro floresan etiketli beta-hücrelerinin transgenik farelerin sağlam pankreas beta-hücrelerinin dağıtım yakalamak için bir yöntem geliştirdiler. Tüm pankreas, pankreas diseksiyonu ve doku temizleme ardından sonra GFP etiketli beta-hücrelerinin incelenir, sanal bir dilim olarak yakalanır. Analiz miktarının toplam beta-hücre alanı, adacık sayısı ve boyutu dağılımı için her adacık beta-hücrelerinin küçük kümeleri için belirli parametreler ve yerleri referans içerir. Adacık tüm dağıtım üç boyutlu olarak çizilen, boyutu ve şekli her adacık dağıtım bilgileri bir bakışta genel beta-hücre alanındaki değişikliklerin niceliksel ve niteliksel karşılaştırma sağlar.
Protocol
Discussion
Sağlam pankreas adacık beta-hücre kümeleri Sanal Dilim görüntüleri analiz adacıklar tüm dağıtım geniş çaplı bir görünüm sağlar. Gelişmeler ve zamanla toplam adacık dağıtım değişiklikleri inceledi ve mukayese edilebilir. Böyle bir örnek, pankreas adacık oluşumu (1) bizim analizde gösterilmiştir. Çeşitli zaman noktalarında (P1-P21) yenidoğan farelerin pancreata kapsamlı bir analiz adacıklar fisyon oluşturduğu olduğunu göstermiştir. Beta-hücre çoğalması, P1-P10 farelerde logno…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Çalışma tarafından desteklenen ABD Kamu Sağlığı Servisi Hibe DK-081.527, DK-072.473, Chicago Diyabet Araştırma ve Eğitim Merkezi (Hayvan modeller Core) Üniversitesi ve Kovler Aile Vakfı hediye DK-20.595.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Forceps | Miltex | |||
| Scissors | F.S.T | 14001-13 | 01n2 | |
| Scissors | F.S.T | 14072-10 | 02s5 | |
| Large glass slide | Electron Microscopy Sciences | 71862-01 | 75x51x1.2mm | |
| Large cover glass | Ted Pella, Inc | 260462 | 50x75mm | |
| Glass Slide | Fisher Scientific | 12-550-15 | 25x75x1.0mm | |
| Cover glass | Fisher Scientific | 12-458-5M | 75x25mm | |
| Cover glass | Erie Scientific | 25mm circle | ||
| Fluorescent microscope | Olympus IX-81 | |||
| Dissection microscope | Olympus SZX12 | |||
| Stereo Investigator | MicroBrightField | |||
| MIP-GFP mice | Jackson Laboratory |
Referências
- Miller, K., Kim, A., Kilimnik, G., Moka, U., Jo, J., Periwal, V., Hara, M. Islet formation during the neonatal development in mice. PloS One. 4, E7739-E7739 (2009).
- Kilimnik, G., Kim, A., Jo, J., Miller, K., Hara, M. Quantification of pancreatic islet distribution in situ in mice. Am J Physiol Endocrinol Metab. 297, E1331-E1338 (2009).
- Hara, M., Wang, X., Kawamura, T., Bindokas, V. P., Dizon, R. F., Alcoser, S. Y., Magnuson, M. A., Bell, G. I. Transgenic mice with green fluorescent protein-labeled pancreatic beta -cells. Am J Physiol Endocrinol Metab. 284, E177-E183 (2003).
- Hara, M., Dizon, R. F., Glick, B. S., Lee, C. S., Kaestner, K. H., Piston, D. W., Bindokas, V. P. Imaging pancreatic beta-cells in the intact pancreas. Am J Physiol Endocrinol Metab. 290, E1041-E1047 (2006).
