ट्रांसजेनिक लीशमैनिया परजीवियों की एक लाइव होस्ट में vivo इमेजिंग में
Summary
एक<em> Vivo में</em> इमेजिंग प्रणाली Trypanosomatid प्रोटोजोआ के साथ murine संक्रमण के मात्रात्मक माप उत्पन्न करने के लिए प्रयोग किया जाता है<em> लीशमैनिया</em>. यह पुराने के पाठ्यक्रम में कई ऊतकों के भीतर luciferase व्यक्त परजीवी का पता लगाने के लिए एक गैर इनवेसिव और गैर घातक विधि है<em> लीशमैनिया</em> एसपीपी. संक्रमण.
Abstract
अलग की प्रजातियों<em> लीशमैनिया</em> परिवार के एक प्रोटोजोआ परजीवी<em> Trypanosomatidae</em> आम तौर पर अलग मानव रोग के अभिव्यक्तियों के कारण. रोग का सबसे आम रूपों आंत लीशमनियासिस (वीएल) और cutaneous लीशमनियासिस (सीएल) हैं. लीशमनियासिस के माउस मॉडल व्यापक रूप से इस्तेमाल कर रहे हैं, लेकिन परजीवी बोझ के murine रोग के दौरान मात्रा का ठहराव चूहों के संक्रमण के बाद विभिन्न समय पर euthanized करने की आवश्यकता है. परजीवी भार तो माइक्रोस्कोपी द्वारा या तो मापा जाता है, कमजोर पड़ने परख, या qPCR प्रवर्धन परजीवी डीएनए के सीमित.<em> Vivo में</em> इमेजिंग प्रणाली (IVIS) एक एकीकृत सॉफ्टवेयर पैकेज है कि एक bioluminescent संकेत रहने वाले जीवों में कोशिकाओं के साथ जुड़े का पता लगाने के की अनुमति देता है. दोनों जानवर के उपयोग को कम करने के लिए और संक्रमण longitudinally व्यक्तियों में इमेजिंग के लिए vivo मॉडल में पालन करें,<em> लीशमैनिया</em> एसपीपी. कारण VL या सीएल स्थापित किए गए थे. परजीवियों के लिए luciferase व्यक्त इंजीनियर थे, और इन चूहों में पेश किए गए या तो intradermally या नसों के द्वारा. ट्रांसजेनिक luciferase ड्राइविंग bioluminescence के मात्रात्मक मापन<em> लीशमैनिया</em> माउस के भीतर परजीवी IVIS का उपयोग कर किए गए थे. व्यक्तिगत चूहों अनुदैर्ध्य अध्ययन के दौरान कई बार हो imaged कर सकते हैं, हमें प्रारंभिक प्रयोगात्मक परजीवी inocula में अंतर पशु भिन्नता का आकलन करने के लिए, और माउस ऊतकों में परजीवी के गुणन का आकलन करने की अनुमति. परजीवियों त्वचीय स्थानों में उच्च संवेदनशीलता के साथ पाया जाता है. हालांकि यह बहुत संभावना है कि संकेत (फोटॉनों / दूसरा / परजीवी) गहरी आंत अंगों में त्वचा की तुलना में कम है, लेकिन मात्रात्मक तुलना में संकेतों के सतही बनाम गहरी साइटों नहीं किया गया है. यह संभव है कि शरीर साइटों के बीच परजीवी संख्या को सीधे तुलना नहीं कर सकते हैं, हालांकि एक ही ऊतकों में परजीवी भार चूहों के बीच तुलना की जा सकती है. एक visceralizing प्रजातियों के उदाहरण (<em> एल infantum chagasi</em>) और एक cutaneous लीशमनियासिस के कारण प्रजातियों (<em> एल Mexicana</em>) दिखाए जाते हैं. IVIS प्रक्रिया की निगरानी और विश्लेषण की एक विस्तृत विविधता के छोटे पशु मॉडल के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है<em> लीशमैनिया</em> मानव लीशमनियासिस के विभिन्न रूपों के कारण प्रजातियों.
Protocol
Discussion
में vivo इमेजिंग प्रणाली (IVIS) पूरे पशु इमेजिंग के लिए या लीशमनियासिस के विभिन्न रूपों के vivo इमेजिंग प्रयोगात्मक संक्रमण मॉडल में एक तरीका प्रदान करता है 18,16 लीशमैनिया एसपीपी.. परजीवी के लि?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के हिस्से में दिग्गजों मामलों के विभाग से मेरिट समीक्षा अनुदान द्वारा वित्त पोषित किया गया था, एनआईएच AI045540 अनुदान, AI067874 AI076233-01 और AI080801 (MEW), और AI29646 (एसएमबी). काम के हिस्से में सीटी और JG के वित्तपोषण के दौरान एनआईएच T32 AI07511 के द्वारा प्रदर्शन किया गया था.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| D-Luciferin Potassium Salt | Reagent | Caliper LifeSciences (Formerly Xenogen) | 122796 | |
| IVIS Imaging System 200 Series | Equipment | Caliper LifeSciences | Other IVIS models that can be used include: Lumina II, Lumina XR, Kinetic, and Spectrum. |
Referências
- Capul, A. A., Barron, T., Dobson, D. E., Turco, S. J., Beverley, S. M. Two functionally divergent UDP-Gal nucleotide sugar transporters participate in phosphoglycan synthesis in Leishmania major. J Biol Chem. 282, 14006-14017 (2007).
- LeBowitz, J. H., Coburn, C. M., McMahon-Pratt, D., Beverley, S. M. Development of a stable Leishmania expression vector and application to the study of parasite surface antigen genes. Proc Natl Acad Sci U S A. 87, 9736-9740 (1990).
- Mureev, S., Kushnir, S., Kolesnikov, A. A., Breitling, R., Alexandrov, K. Construction and analysis of Leishmania tarentolae transgenic strains free of selection markers. Mol Biochem Parasitol. 155, 71-83 (2007).
- Chakkalath, H. R. Priming of a beta-galactosidase (beta-GAL)-specific type 1 response in BALB/c mice infected with beta-GAL-transfected Leishmania major. Infect Immun. 68, 809-814 (2000).
- Sacks, D. L., Perkins, P. V. Identification of an infective stage of Leishmania promastigotes. Science. 223, 1417-1419 (1984).
- da Silva, R., Sacks, D. L. Metacyclogenesis is a major determinant of Leishmania promastigote virulence and attenuation. Infect Immun. 55, 2802-2806 (1987).
- Spath, G. F., Beverley, S. M. A lipophosphoglycan-independent method for isolation of infective Leishmania metacyclic promastigotes by density gradient centrifugation. Exp Parasitol. 99, 97-103 (2001).
- Scott, P., Caspar, P., Sher, A. Protection against Leishmania major in BALB/c mice by adoptive transfer of a T cell clone recognizing a low molecular weight antigen released by promastigotes. J Immunol. 144, 1075-1079 (1990).
- Belkaid, Y. The role of interleukin (IL)-10 in the persistence of Leishmania major in the skin after healing and the therapeutic potential of anti-IL-10 receptor antibody for sterile cure. J Exp Med. 194, 1497-1506 (2001).
- Wilson, M. E. Local suppression of IFN-gamma in hepatic granulomas correlates with tissue-specific replication of Leishmania chagasi. J Immunol. 156, 2231-2239 (1996).
- McElrath, M. J., Murray, H. W., Cohn, Z. A. The dynamics of granuloma formation in experimental visceral leishmaniasis. J Exp Med. 167, 1927-1937 (1988).
- Ato, M. Loss of dendritic cell migration and impaired resistance to Leishmania donovani infection in mice deficient in CCL19 and CCL21. J Immunol. 176, 5486-5493 (2006).
- Ahmed, S. Intradermal infection model for pathogenesis and vaccine studies of murine visceral leishmaniasis. Infect Immun. 71, 401-410 (2003).
- Kamala, T. Hock immunization: a humane alternative to mouse footpad injections. J Immunol Methods. 328, 204-214 (2007).
- Lang, T., Goyard, S., Lebastard, M., Milon, G. Bioluminescent Leishmania expressing luciferase for rapid and high throughput screening of drugs acting on amastigote-harbouring macrophages and for quantitative real-time monitoring of parasitism features in living mice. Cell Microbiol. 7, 383-392 (2005).
- Brittingham, A., Miller, M. A., Donelson, J. E., Wilson, M. E. Regulation of GP63 mRNA stability in promastigotes of virulent and attenuated Leishmania chagasi. Mol Biochem Parasitol. 112, 51-59 (2001).
- Roy, G. Episomal and stable expression of the luciferase reporter gene for quantifying Leishmania spp. infections in macrophages and in animal models. Mol Biochem Parasitol. 110, 195-206 (2000).
- Contag, C. H. Photonic detection of bacterial pathogens in living hosts. Mol Microbiol. 18, 593-603 (1995).
- Hardy, J., Margolis, J. J., Contag, C. H. Induced Biliary Excretion of Listeria monocytogenes. Infect. Immun. 74, 1819-1827 (2006).
- Lecoeur, H. Optimization of Topical Therapy for Leishmania major Localized Cutaneous Leishmaniasis Using a Reliable C57BL/6 Model. PLoS Negl Trop Dis. 1, e34-e34 (2007).
- Lang, T., Lecoeur, H., Prina, E. Imaging Leishmania development in their host cells. Trends Parasitol. 25, 464-473 (2009).
