Drosophila melanogaster Eggstokk disseksjon: En teknikk for Ex Vivo vev forberedelse

Abstract

Kilde: Parker, D. J., et al. Studere mitokondriestruktur og funksjon i Drosophila Ovaries. J. Vis. Utt. (2017).

Denne videoen beskriver den generelle anatomien til Drosophila-eggstokken og har en metode for dissekering av eggstokkene for levende eller fast bildebehandling.

Protocol

Denne protokollen er et utdrag fra Parker et al.,Studere mitokondriestruktur og funksjon i Drosophila Ovaries, J. Vis. Exp. (2017). 1. Forberedelse av Drosophila (verktøyene som kreves er avbildet i figur 1A) For noen av de beskrevne forsøkene, samle Drosophila (opprettholdt ved romtemperatur, eller 25 °C) innen 5 dager etter eklosjon og legg dem i et hetteglass fylt med 5 – 7 ml Drosop…

Representative Results

Figur 1: Eksperimentell plan og forberedelse. (A) Verktøy som brukes i metodene beskrevet: A. Fly hetteglass; B. Insekt dissekering medium; C. Paraformaldehyd; D. Fly børste; E. Dissekering av tallerken; F. Dekk glass; G. Mikrofunksjonsrør. H. Glassbunnet tallerken; I. Glass lysbilde; J. 1000-μL mikropipette; K. 200-μL mikropipette; L. 2,5-μL mikropipette; M. Erting nål med en bøy…

Materials

Grace's Media (Insect Dissecting Medium)	Fisher Scientific	30611031-2
41 Paraformaldehyde AQ	Electronic Microscopy Sciences	50-259-99
PolyLysine	MP Biomedicals	ICN15017625
Fly Vials	Fisher Scientific	AS-515
Fly Vial Plugs	Fisher Scientific	AS273
Jazzmix Drosophila food (Drosophila food)	Fisher Scientific	AS153
Azer Scientific EverMark Select Microscope Slides	Fisher Scientific	22-026-252
Microscope Cover Glass	Fisher Scientific	12-542-B
Mat Tek Corp Glass Bottom Mircrowell Dish	Fisher Scientific	P35G-0-14-C
Active Dried Yeast	Fisher Scientific	ICN10140001
Dumont #5 Forceps	Fine Science Technologies	11251-20
Moria Nickel Plated Pin Holder	Fine Science Technologies	26016-12
Minutien Pins	Fine Science Technologies	26002-15
MYFP ( w[*]; P{w[+mC]=sqh-EYFP-Mito}3 )	Bloomington Stock Center	7194
Fly Pad	Fly stuff	59-118
Blowgun	Fly stuff	54-104
Blowgun needle	Flystuff	54-119
Dissecting Microscope	Carl Zeiss	Stemi 2000