Lesão neural induzida por laser de dois fótons: um método para observar a degeneração e regeneração do axônio em larvas de Drosophila

Abstract

Fonte: Li, D., et al. Um modelo de lesão in vivo de Drosophila para estudar a neuroregeneração no sistema nervoso periférico e central. J. Vis. Exp. (2018).

Este vídeo descreve a ablação a laser de dois fótons de axônios em uma larva de Drosophila melanogaster e um exemplo de protocolo para induzir lesão e imagem do local da lesão.

Protocol

Este protocolo é um trecho de Li et al., Um modelo de lesão in vivo de Drosophila para estudar a neuroregeneração no sistema nervoso periférico e central, J. Vis. Exp. (2018).

1. Lesão de dois fótons e imagens confocais

1. Configuração do microscópio
   OBSERVAÇÃO: Um microscópio confocal de varredura a laser com um laser de dois fótons foi usado para este experimento, mas outros sistemas com uma configuração equivalente também serão suficientes. O laser de dois fótons (930 nm) foi usado para aplicar lesões e um laser de argônio (488 nm) foi usado para imagens confocai....

Results

Figura 1: A regeneração do axônio do neurônio Da na periferia exibe especificidade de classe. (A e B) Desenho esquemático mostrando a posição das larvas. (C) Desenho esquemático dos neurônios da classe III. (D) Axônios dos neurônios da classe III ddaF, marcados com 19-12-Gal4, UAS-CD4-tdGFP, repo-Gal80 / +, não voltam a crescer. (E) Desenho esquemático d.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Éter dietílico, reagente ACS, anidro	Acros Orgânicos	AC615080010
Óleo Halocarbon 27	Genesee Científico	Rolamento 59-133
Ácido propiônico	J.T.Baker	U33007
Vidros de cobertura: retângulos	Fisher Científico	12-544-D	50 mm X 22 mm
Microscópio de varredura a laser Zeiss LSM 880	Zeiss
Software Zen	Zeiss
Camaleão Ultra II	coerente