Två-foton laserinducerad neural skada: En metod för att observera Axon degeneration och regenerering i Drosophila Larver

Abstract

Källa: Li, D., et al. En Drosophila In Vivo skademodell för att studera neuroregeneration i perifera och centrala nervsystemet. J. Vis. Exp. (2018).

Denna video beskriver två-foton laser ablation av axons i en Drosophila melanogaster larva och ett exempel protokoll för att inducera skada och avbilda skadestället.

Protocol

Detta protokoll är ett utdrag från Li et al., A Drosophila In Vivo Injury Model for Studying Neuroregeneration in the Peripheral and Central Nervous System, J. Vis. Exp. (2018). 1. Två-foton skada och confocal imaging Inställningar för mikroskopOBS: Ett konfokalt laserskanningsmikroskop med en två-fotonlaser användes för detta experiment, men andra system med motsvarande inställning kommer också att räcka. Två-f…

Representative Results

Figur 1: Da neuron axon regenerering i periferin visar klass specificitet. Aoch B) Schematisk ritning som visar larvernas position. C)Schematisk ritning av nervceller av klass III da. (D) Axons av klass III da-neuroner ddaF, märkta med 19-12-Gal4, UAS-CD4-tdGFP, repo-Gal80/+, misslyckas med att återväxt. (E) Schematisk ritning av klass IV da nervceller…

Materials

Diethyl ether, ACS reagent, anhydrous	Acros Organics	AC615080010
Halocarbon 27 Oil	Genesee Scientific	59-133
Propionic Acid	J.T.Baker	U33007
Cover Glasses: Rectangles	Fisher Scientific	12-544-D	50 mm X 22 mm
Zeiss LSM 880 laser scanning microscope	Zeiss
Zen software	Zeiss
Chameleon Ultra II	Coherent