Mikroinjeksjon av Drosophila sykepleierceller: En metode for intracellulær levering

Abstract

Kilde: Catrina, I. E., et al. Visualisering og sporing Endogene mRNAer i Live Drosophila melanogaster Egg Chambers. J. Vis. Utt. (2019).

På grunn av deres store størrelse og relativt enkle organisasjon, er Drosophila sykepleierceller ideelt egnet for levende celleavbildningsstudier. Denne videoen beskriver en mikroinjeksjonsmetode for eksogene forbindelser som leveres inn i cellene, og den omtalte protokollen demonstrerer prosedyren med fluorescerende oligonukleotidprober kalt molekylære beacons (MB) som brukes til å visualisere endogene mRNA-transkripsjoner.

Protocol

Denne protokollen er hentet fra Catrina et al.,Visualisering og sporing Endogene mRNAer i Live Drosophila melanogaster Egg Chambers, J. Vis. Exp. (2019). 1. Design av MB for Live Cell Imaging Brett mål-RNA-sekvensen for å forutsi mRNA-målets sekundære struktur ved hjelp av “RNA-skjemaet” fra mfoldserveren (http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/RNA-Foldi…

Materials

Spectrofluorometer	Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon	n/a	Photon counting spectrofluorometer
Quartz cuvette	Fireflysci (former Precision Cells Inc.)	701MFL
Dumont #5 tweezer	World Precision Instruments	501985	Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers
Halocarbon oil 700	Sigma-Aldrich	H8898
Cover slip No.1 22 mm x 40 mm	VWR	48393-048
Dissecting microscope	Leica MZ6 Leica Microsystems Inc.	n/a
CO2 fruit fly anesthesia pad	Genesee Scienific	59-114
Tris-HCL pH 7.5	Sigma-Aldrich	1185-53-1
Magnesium chloride	Sigma-Aldrich	7791-18-6
NaCl	Sigma-Aldrich	7647-14-5
Spinning disc confocal microscope	Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc.	n/a
Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera	Hamamatsu	n/a
PatchMan NP 2 Micromanipulator	Eppendorf Inc.	920000037
FemtoJet Microinjector	Eppendorf Inc.	920010504
Injection needle: Femtotips II	Eppendorf Inc.	930000043
Loading tip: 20 μL Microloader	Eppendorf Inc.	930001007
Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm	VWR	48393-026; 48393-172
Dry yeast	Any grocery store	n/a
Computer, > 20 GB RAM			Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing