Microinjeção de Células enfermeiras Drosophila: Um Método de Parto Intracelular

Abstract

Fonte: Catrina, I. E., et al. Visualizando e Rastreando mRNAs endógenos em Câmaras de Ovos de Melanogaster Drosophila Ao Vivo. J. Vis. Exp. (2019).

Devido ao seu grande tamanho e organização relativamente simples, as células enfermeiras de Drosophila são idealmente adequadas para estudos de imagem de células vivas. Este vídeo descreve um método de microinjeção para a entrega de compostos exógenos nas células, e o protocolo em destaque demonstra o procedimento com sondas oligonucleotídeos fluorescentes chamadas de faróis moleculares (MBs) usados para visualizar transcrições de mRNA endógenos.

Protocol

Este protocolo é extraído de Catrina et al., Visualizando e Rastreando mRNAs endógenos em Câmaras de Ovos de Drosophila Live Drosophila, J. Vis. Exp. (2019). 1. Design de MBs para Imagens de Células Vivas Dobre a sequência de RNA de destino para prever a estrutura secundária do alvo mRNA usando o “formulário RNA” do servidor mfold (http://unafold.rna…

Materials

Spectrofluorometer	Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon	n/a	Photon counting spectrofluorometer
Quartz cuvette	Fireflysci (former Precision Cells Inc.)	701MFL
Dumont #5 tweezer	World Precision Instruments	501985	Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers
Halocarbon oil 700	Sigma-Aldrich	H8898
Cover slip No.1 22 mm x 40 mm	VWR	48393-048
Dissecting microscope	Leica MZ6 Leica Microsystems Inc.	n/a
CO2 fruit fly anesthesia pad	Genesee Scienific	59-114
Tris-HCL pH 7.5	Sigma-Aldrich	1185-53-1
Magnesium chloride	Sigma-Aldrich	7791-18-6
NaCl	Sigma-Aldrich	7647-14-5
Spinning disc confocal microscope	Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc.	n/a
Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera	Hamamatsu	n/a
PatchMan NP 2 Micromanipulator	Eppendorf Inc.	920000037
FemtoJet Microinjector	Eppendorf Inc.	920010504
Injection needle: Femtotips II	Eppendorf Inc.	930000043
Loading tip: 20 μL Microloader	Eppendorf Inc.	930001007
Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm	VWR	48393-026; 48393-172
Dry yeast	Any grocery store	n/a
Computer, > 20 GB RAM			Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing