성인 Drosophila 파리의 주입 : 화합물 또는 라벨 배달의 방법

Abstract

출처: 나자리오-툴레, A. E., 우, L. P. 과일 플라이의 세포 면역 반응을 평가, 드로소필라 멜라노가스터,인 비보 파고세포 분석증을 사용하여. J. 비스 익스펙. (2019).

이 비디오는 살아있는 성인 파리의 주입을 수행하는 방법을 설명하고 표시 입자와 trypan 파란색이 phagocytosis를 분석하기 위해 플라이 복부에 주입되는 예제 프로토콜을 포함한다.

Protocol

이 프로토콜은 나자리오-툴레와 우에서 발췌, 과일 비행의 세포 면역 반응을 평가, 드로소필라 멜라노가스터, 인 비보 파고시토시스 분석서를 사용하여, J. Vis. Exp. (2019). 1. 플루오레세인 입자를 주입준비 990 μL 멸균 1x PBS 와 10 μL 50 mM 나트륨 아지드를 추가하여 10 mg/mL의 재고 농도로 플루오레세인(재료표 참조)으로 표시된 10 mg의시판되?…

Materials

5430-10 PicoNozzle Kit	World Precision Instruments	5430-10	Holder for 1.0mm pipette
E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Fluorescein conjugate	Invitrogen	E2861	Killed E. coli labeled with FITC (Fluorescein). Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-negative bacteria. (~494/~518 nm)
Needle Pipette Puller	David Kopf Instruments	Model 725
Pneumatic PicoPump PV820	World Precision Instruments	SYS-PV820	The World Precision Instruments Pneumatic PicoPump PV820 uses differential pressures to hold liquid in the glass needle between injections. The user manually controls short bursts of gas pressure to expel the liquid – allowing delivery of sub-nanoliter volumes. The amount of liquid delivered depends on two main variables – the size of the glass needle opening and the amount of time injection pressure is applied. set the instrument to 100 ms "TIMED" mode.
Thin Wall Glass Capillaries	World Precision Instruments	TW100F-3	Needles for injection. OD = 1.0 mm
Trypan Blue Solution (0.4%)	Sigma	T8154	Used to quench extracellular fluorescence of Fluorescein, Alexa Fluor, or Texas Red labeled particles.