Injeção de Moscas de Drosophila Adulta: Um método de entrega de compostos ou rótulos

Abstract

Fonte: Nazario-Toole, A. E., Wu, L. P. Avaliando a Resposta Imune Celular da Mosca da Fruta, Drosophila melanogaster, Usando um Ensaio de Fagocitose In Vivo. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo descreve como realizar uma injeção de moscas adultas vivas e inclui um protocolo de exemplo no qual partículas rotuladas e azul tripano são injetados em abdômens de mosca para avaliar a fagocitose.

Protocol

Este protocolo é um trecho de Nazario-Toole e Wu, Avaliando a Resposta Imune Celular da Mosca da Fruta, Drosophila melanogaster, Utilizando um Ensaio de Fagocitose In Vivo, J. Vis. Exp. (2019). 1. Prepare partículas de fluoresceína para injeção Reconstituir 10 mg de partículas de bactérias comercialmente disponíveis e mortas pelo calor rotuladas com fluoresceína (ver Tabela de Materiais) a uma concentração de estoque de 10 mg/mL …

Materials

5430-10 PicoNozzle Kit	World Precision Instruments	5430-10	Holder for 1.0mm pipette
E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Fluorescein conjugate	Invitrogen	E2861	Killed E. coli labeled with FITC (Fluorescein). Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-negative bacteria. (~494/~518 nm)
Needle Pipette Puller	David Kopf Instruments	Model 725
Pneumatic PicoPump PV820	World Precision Instruments	SYS-PV820	The World Precision Instruments Pneumatic PicoPump PV820 uses differential pressures to hold liquid in the glass needle between injections. The user manually controls short bursts of gas pressure to expel the liquid – allowing delivery of sub-nanoliter volumes. The amount of liquid delivered depends on two main variables – the size of the glass needle opening and the amount of time injection pressure is applied. set the instrument to 100 ms "TIMED" mode.
Thin Wall Glass Capillaries	World Precision Instruments	TW100F-3	Needles for injection. OD = 1.0 mm
Trypan Blue Solution (0.4%)	Sigma	T8154	Used to quench extracellular fluorescence of Fluorescein, Alexa Fluor, or Texas Red labeled particles.