Yetişkin Drosophila Sineklerinin Enjeksiyonu: Bileşik veya Etiket Teslimi Yöntemi

Abstract

Kaynak: Nazario-Toole, A. E., Wu, L. P. Meyve Sineğinin Hücresel İmmün Tepkisini Değerlendirme, Drosophila melanogaster, In Vivo Fagositoz Tahlili Kullanarak. J. Vis. Exp. (2019).

Bu video, canlı yetişkin sinek enjeksiyonunun nasıl gerçekleştirildiğini açıklar ve etiketli parçacıkların ve trippan mavisinin fagositozu test etmek için sinek karınlarına enjekte edildiği örnek bir protokol içerir.

Protocol

Bu protokol Nazario-Toole ve Wu’dan bir alıntıdır, Meyve Sineğinin Hücresel Bağışıklık Tepkisini Değerlendiren, Drosophila melanogaster, In Vivo Phagocytosis Tahlil Kullanarak, J. Vis. Exp. (2019). 1. Floresan parçacıklarını enjeksiyon için hazırlayın 990 μL steril 1x PBS ve 10 μL 50 mM sodyum azit ekleyerek 10 mg/mL stok konsantrasyonuna floresan (bkz. Malzeme Tablosu)ile etiketlenmiş 10 mg ticari olarak mevcut, ısıd…

Materials

5430-10 PicoNozzle Kit	World Precision Instruments	5430-10	Holder for 1.0mm pipette
E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Fluorescein conjugate	Invitrogen	E2861	Killed E. coli labeled with FITC (Fluorescein). Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-negative bacteria. (~494/~518 nm)
Needle Pipette Puller	David Kopf Instruments	Model 725
Pneumatic PicoPump PV820	World Precision Instruments	SYS-PV820	The World Precision Instruments Pneumatic PicoPump PV820 uses differential pressures to hold liquid in the glass needle between injections. The user manually controls short bursts of gas pressure to expel the liquid – allowing delivery of sub-nanoliter volumes. The amount of liquid delivered depends on two main variables – the size of the glass needle opening and the amount of time injection pressure is applied. set the instrument to 100 ms "TIMED" mode.
Thin Wall Glass Capillaries	World Precision Instruments	TW100F-3	Needles for injection. OD = 1.0 mm
Trypan Blue Solution (0.4%)	Sigma	T8154	Used to quench extracellular fluorescence of Fluorescein, Alexa Fluor, or Texas Red labeled particles.