Drosophila In Vivo Imagerie calcique : une méthode d’imagerie fonctionnelle de l’activité neuronale

Abstract

Source : Hancock, C. E., et coll. In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo décrit l’imagerie in vivo de calcium dans les neurones de Drosophila utilisant GCaMP. Le clip de protocole en vedette montre comment enregistrer les changements dans la fluorescence GCaMP des neurones du corps champignon au cours d’une expérience de conditionnement olfactif.

Protocol

Ce protocole est un extrait de Hancock et coll., In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019). 1. Imagerie in vivo calcium Utilisez un microscope multiphoton équipé d’un laser infrarouge et d’un objectif d’immersion dans l’eau (voir tableau des matériaux),installé sur une table isolée par vibration. Pour la visualisation des indicateurs de calcium à ba…

Materials

1-Octen-3-ol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	O5284	Chemical used as odorant
3-Octanol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	218405	Chemical used as odorant
4-Methylcyclohexanol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	153095	Chemical used as odorant
Bandpass filter for EGFP (525/50 nm)	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany
Mineral oil	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	M8410	Used as diluent for odorants
Mode-locked Ti-Sapphire laser Chameleon Vision 2	Coherent Inc., Santa Clara, CA, USA		Tunable infrared femtosecond laser
Multiphoton Microscope LSM 7MP equipped with BiG detectors	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany		Multiphoton microscope, multiple companies provide similar devices.
Plan-Apochromat 20x (NA = 1.0) water immersion objective	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany	421452-9900-000	Objective W "Plan-Apochromat" 20x/1.0 DIC M27 70mm
Visual Basics of Applicatons (VBA) software to receive a trigger from the odor-delivery device and the electric shock application device (power supply) to interact with the ZEN software from Zeiss that controls the microscope	Custom-written and available upon request	n.a.	n.a.