Drosophila In Vivo Kalsiyum Görüntüleme: Nöronal Aktivitenin Fonksiyonel Görüntüleme Yöntemi

Abstract

Kaynak: Hancock, C. E., vd. Drosophila melanogaster’daÖğrenme Kaynaklı Sinaptik Plastisitenin In Vivo Optik Kalsiyum Görüntülemesi. J. Vis. Exp. (2019).

Bu video, GCaMP kullanan Drosophila nöronlarında in vivo kalsiyum görüntülemeyi açıklar. Öne çıkan protokol klibi, koku alma şartlandırma deneyi sırasında mantar vücut nöronlarından GCaMP floresanındaki değişikliklerin nasıl kaydedildiğini gösterir.

Protocol

Bu protokol, Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019)’da Öğrenme Kaynaklı Sinaptik PlastisiteninIn Vivo Optik Kalsiyum Görüntülemesinden bir alıntıdır.  1. In vivo kalsiyum görüntüleme Titreşimle izole edilmiş bir masaya monte edilmiş kızılötesi lazer ve su daldırma hedefi (bkz. Malzeme Tablosu)ile donatılmış çok sesli bir mikroskop kullanın. GFP tabanlı kalsiyum göstergelerinin görselleştirilmesi için laze…

Materials

1-Octen-3-ol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	O5284	Chemical used as odorant
3-Octanol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	218405	Chemical used as odorant
4-Methylcyclohexanol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	153095	Chemical used as odorant
Bandpass filter for EGFP (525/50 nm)	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany
Mineral oil	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA	M8410	Used as diluent for odorants
Mode-locked Ti-Sapphire laser Chameleon Vision 2	Coherent Inc., Santa Clara, CA, USA		Tunable infrared femtosecond laser
Multiphoton Microscope LSM 7MP equipped with BiG detectors	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany		Multiphoton microscope, multiple companies provide similar devices.
Plan-Apochromat 20x (NA = 1.0) water immersion objective	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany	421452-9900-000	Objective W "Plan-Apochromat" 20x/1.0 DIC M27 70mm
Visual Basics of Applicatons (VBA) software to receive a trigger from the odor-delivery device and the electric shock application device (power supply) to interact with the ZEN software from Zeiss that controls the microscope	Custom-written and available upon request	n.a.	n.a.