Drosophila In Vivo Imagem de cálcio: um método para imagem funcional da atividade neuronal

Resumo

Fonte: Hancock, C. E., et al. Imagem Óptica de Cálcio In Vivo da Plasticidade Sináptica Induzida por Aprendizagem em Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo descreve imagens de cálcio in vivo em neurônios de Drosophila usando GCaMP. O clipe de protocolo em destaque mostra como registrar alterações na fluorescência do GCaMP dos neurônios do corpo do cogumelo durante um experimento de condicionamento olfativo.

Protocolo

Este protocolo é um trecho de Hancock et al., In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp.(2019).

1. Imagem de cálcio in vivo

1. Use um microscópio multifotônico equipado com um laser infravermelho e uma objetiva de imersão em água (consulte a Tabela de Materiais), instalado em uma mesa isolada por vibração. Para a visualização de indicadores de cálcio baseados em GFP, ajuste o laser para um comprimento de onda de excitação de 920 nm e instale um filtro passa-banda GFP.
2. Usando o botão de ajuste Z grosso, escanei....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
1-Oitavo-3-ol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA	O5284	Produto químico usado como odorante
3-Octanol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA	218405	Produto químico usado como odorante
4-metilciclohexanol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA	153095	Produto químico usado como odorante
Filtro passa-banda para EGFP (525/50 nm)	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Alemanha
Óleo mineral	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA	M8410	Usado como diluente para odores
Laser Ti-Sapphire com bloqueio de modo Chameleon Vision 2	Coherent Inc., Santa Clara, CA, EUA		Laser infravermelho ajustável do femtosegundo
Microscópio Multifotônico LSM 7MP equipado com detectores BiG	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Alemanha		Microscópio multifotônico, várias empresas fornecem dispositivos semelhantes.
Objetiva de imersão em água Plan-Apochromat 20x (NA = 1,0)	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Alemanha	Rolamento 421452-9900-000	Objetiva W "Plan-Apochromat" 20x/1.0 DIC M27 70mm
Visual Basics of Applicatons (VBA) para receber um gatilho do dispositivo de entrega de odor e o dispositivo de aplicação de choque elétrico (fonte de alimentação) para interagir com o software ZEN da Zeiss que controla o microscópio	Escrito sob medida e disponível mediante solicitação	n.a.	n.a.