Dissektion af Midgut fra en voksen Fly: En metode til at isolere fordøjelseskanalen

Abstract

Kilde: Tauc, H.M., et al. Isolere tarm stamceller fra voksne Drosophila Midguts af FACS at studere stamcelle adfærd under aldring. J. Vis. Exp. (2014).

I denne video fremhæver vi en dissektion af den voksne Drosophila tarm og indsamling af midguts egnet til enkeltcelle dissociation og FACS for at isolere tarmstamceller.

Protocol

Denne protokol er et uddrag fra Tauc et al.,isolere tarm stamceller fra voksne Drosophila Midguts af FACS at studere stamcelle adfærd under aldring, J. Vis. Exp. (2014). BEMÆRK: Hvis denne protokol første gang bruges til at isolere ISC’er ved FAC-sortering, er følgende kontrolelementer obligatoriske for i første omgang at indstille FACS-parametrene korrekt: Dissocierede celler fra vild type (f.eks. w1118</…

Materials

Forceps: Dumont, Inox Biologie #5	Fine Science Tools	11252-20
SefarNitex 03-150um/38 (35 µm nylon mesh)	Sefar	3A03-0150-102-00
Falcon 5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube with Cell Strainer Snap Cap	Corning	352235
Polymax 1040	Heidolph	543-42210-00
Albumin from bovine serum (BSA)	Sigma	A4503-50G
0.5% Trypsin-EDTA	Invitrogen	15400-054	Trypsin obtained from a different company most likely has a different activity and the duration of the trypsin digest has to be adjusted accordingly.
SYTOX Blue Dead Cell Stain for flow cytometry	Life Technologies	S34857
RNAlater Stabilization Solution	Life Technologies	AM7023	Other solutions, e.g., Trizol can be used for subsequent RNA isolation
FACSAria II cell sorter	Becton Dickinson		Turn on one hour prior to sorting