Dissection du midgut d’une mouche adulte : une méthode pour isoler le tube digestif
Published: April 30, 2023
Abstract
Source : Tauc, H.M., et autres cellules souches intestinales isolantes des midguts adultes de Drosophila par FACS pour étudier le comportement de cellules souches pendant le vieillissement. J. Vis. Exp. (2014).
Dans cette vidéo, nous soulignons une dissection de l’intestin adulte de Drosophila et la collecte des midguts appropriés à la dissociation de single-cell et au FACS afin d’isoler des cellules souches intestinales.
Protocol
Ce protocole est un extrait de Tauc et coll., Isolating Intestinal Stem Cells from Adult Drosophila Midguts par FACS to Study Stem Cell Behavior During Aging, J. Vis. Exp. (2014). REMARQUE: Si ce protocole est utilisé pour la première fois pour isoler les CCI par tri des AEC, les contrôles suivants sont obligatoires afin de définir initialement correctement les paramètres facs : cellules dissociées de type sauvage…
Materials
| Forceps: Dumont, Inox Biologie #5 | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| SefarNitex 03-150um/38 (35 µm nylon mesh) | Sefar | 3A03-0150-102-00 | |
| Falcon 5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube with Cell Strainer Snap Cap | Corning | 352235 | |
| Polymax 1040 | Heidolph | 543-42210-00 | |
| Albumin from bovine serum (BSA) | Sigma | A4503-50G | |
| 0.5% Trypsin-EDTA | Invitrogen | 15400-054 | Trypsin obtained from a different company most likely has a different activity and the duration of the trypsin digest has to be adjusted accordingly. |
| SYTOX Blue Dead Cell Stain for flow cytometry | Life Technologies | S34857 | |
| RNAlater Stabilization Solution | Life Technologies | AM7023 | Other solutions, e.g., Trizol can be used for subsequent RNA isolation |
| FACSAria II cell sorter | Becton Dickinson | Turn on one hour prior to sorting |
Citar este artigo
Dissection of the Midgut from an Adult Fly: A Method for Isolating the Digestive Tract. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20150, doi: (2023).