Dissezione del Midgut da una mosca adulta: un metodo per isolare il tratto digestivo
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Tauc, H.M., et al. J. Vis. Exp. (2014).
In questo video, evidenziamo una dissezione dell’intestino drosofilo adulto e la raccolta di moscerini adatti alla dissociazione a una cellula e facs al fine di isolare le cellule staminali intestinali.
Protocol
Questo protocollo è un estratto da Tauc et al., Isolando le cellule staminali intestinali dai moscerini della Drosophila adulta della FACS per studiare il comportamento delle cellule staminali durante l’invecchiamento, J. Vis. Exp. (2014). NOTA: Se questo protocollo viene utilizzato per la prima volta per isolare gli ISC mediante ordinamento FAC, i seguenti controlli sono obbligatori per impostare inizialmente correttamente i parametri…
Materials
| Forceps: Dumont, Inox Biologie #5 | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| SefarNitex 03-150um/38 (35 µm nylon mesh) | Sefar | 3A03-0150-102-00 | |
| Falcon 5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube with Cell Strainer Snap Cap | Corning | 352235 | |
| Polymax 1040 | Heidolph | 543-42210-00 | |
| Albumin from bovine serum (BSA) | Sigma | A4503-50G | |
| 0.5% Trypsin-EDTA | Invitrogen | 15400-054 | Trypsin obtained from a different company most likely has a different activity and the duration of the trypsin digest has to be adjusted accordingly. |
| SYTOX Blue Dead Cell Stain for flow cytometry | Life Technologies | S34857 | |
| RNAlater Stabilization Solution | Life Technologies | AM7023 | Other solutions, e.g., Trizol can be used for subsequent RNA isolation |
| FACSAria II cell sorter | Becton Dickinson | Turn on one hour prior to sorting |
Citar este artigo
Dissection of the Midgut from an Adult Fly: A Method for Isolating the Digestive Tract. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20150, doi: (2023).