Midgut'un Yetişkin Bir Sinekten Diseksiyonu: Sindirim Sistemini izole Etmek İçin Bir Yöntem
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Tauc, H.M., vd. Yaşlanma Sırasında Kök Hücre Davranışını İncelemek için Facs tarafından Yetişkin Drosophila Midguts’tan Bağırsak Kök Hücrelerini İzolasyon. J. Vis. Exp. (2014).
Bu videoda, erişkin Drosophila bağırsağının diseksiyonunu ve bağırsak kök hücrelerini izole etmek için tek hücreli ayrışma ve FACS için uygun midgutların toplanmasını vurguluyoruz.
Protocol
Bu protokol, Tauc ve ark.’dan bir alıntıdır, Yetişkin Drosophila Midguts’tan Bağırsak Kök HücreleriniN YAŞLANMA Sırasında Kök Hücre Davranışını İncelemek için İzolasyon, J. Vis. Exp. (2014). NOT: Bu protokol, ISC’leri FAC sıralama ile yalıtmak için ilk kez kullanılıyorsa, BAŞLANGıÇTA FACS parametrelerini düzgün ayarlamak için aşağıdaki denetimler zorunludur: Vahşi türden ayrışmış …
Materials
| Forceps: Dumont, Inox Biologie #5 | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| SefarNitex 03-150um/38 (35 µm nylon mesh) | Sefar | 3A03-0150-102-00 | |
| Falcon 5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube with Cell Strainer Snap Cap | Corning | 352235 | |
| Polymax 1040 | Heidolph | 543-42210-00 | |
| Albumin from bovine serum (BSA) | Sigma | A4503-50G | |
| 0.5% Trypsin-EDTA | Invitrogen | 15400-054 | Trypsin obtained from a different company most likely has a different activity and the duration of the trypsin digest has to be adjusted accordingly. |
| SYTOX Blue Dead Cell Stain for flow cytometry | Life Technologies | S34857 | |
| RNAlater Stabilization Solution | Life Technologies | AM7023 | Other solutions, e.g., Trizol can be used for subsequent RNA isolation |
| FACSAria II cell sorter | Becton Dickinson | Turn on one hour prior to sorting |
Citar este artigo
Dissection of the Midgut from an Adult Fly: A Method for Isolating the Digestive Tract. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20150, doi: (2023).