הרכבה אגר: שיטה בסיסית של הרכבה עוברי זברה חיה להדמיה לטווח ארוך
Published: April 30, 2023
Abstract
מקור: הגדורן א.ג., ואח ‘. דור של עוברי זברה פרה-ביוטיים על ידי היתוך כירורגי של פיתוח Blastulae. ג’יי ויס אקספ. (2016).
וידאו זה מתאר צעד אחר צעד הוראות על הרכבה עוברי זברה חי על צלחת 6 גם באמצעות agarose להמיס נמוך. הוא גם מספק את התהליך כדי לרכוש תמונות של עוברים חיים ולנתח אותו באמצעות תוכנה.
Protocol
1. הגדרת מיקרוסקופ, רכישת תמונה, עיבוד וניתוח הכן 0.8% נקודת התכה נמוכה (LMP) agarose: להוסיף 0.8 גרם LMP agarose ל 100 מיליליטר E3 וחום עד מומס לחלוטין. בעוד חם, aliquot 1 מ”ל של LMP agarose לתוך 1.5 מ”ל צינורות microfuge בבלוק חימום 37 מעלות צלזיוס. ה-LMP agarose יישאר מותך ב 37 °C (69 °F). הוסף 40 μl של 4 מ”ג / מ”ל (25x), pH 7.0 tricaine …
Materials
| LMP agarose (Ultrapure LMP agarose) | Invitrogen | 16520100 |
| Tricaine (powder) (Tricaine Methanesulfonato, Tricaine-S) | Western Chemical Inc | MS 222 |
| Glass-bottom 6-well plates used for imaging | MatTek | P06G1.5-20-F |
| 10 ml pipette pump (green) (Pipette Pump Pipettor) | Novatech International | F37898-0000 |
Citar este artigo
Agar Mounting: A Basic Method of Mounting Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20187, doi: (2023).