Ağar Montajı: Uzun Süreli Görüntüleme için Canlı Zebra Balığı Embriyolarının Montajının Temel Yöntemi
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Hagedorn E. J., vd. Gelişmekte Olan Blastulae’nin Cerrahi Füzyonu ile Parabiyotik Zebra Balığı Embriyolarının Üretimi. J. Vis. Exp. (2016).
Bu videoda, canlı zebra balığı embriyolarının düşük eriyik agarose kullanılarak 6 kuyu plakasına monte edilmesine ilişkin talimatlar adım adım açıklanmaktadır. Ayrıca canlı embriyoların görüntülerini elde etme ve yazılım kullanarak analiz etme sürecini sağlar.
Protocol
1. Mikroskop Kurulumu, Görüntü Alma, İşleme ve Analiz % 0.8 düşük erime noktası (LMP) agarose hazırlayın: 100 ml E3’e 0.8 g LMP agarose ekleyin ve tamamen çözünene kadar ısıtın. Sıcakken, aliquot 1 ml LMP agarose 37 ° C ısıtma bloğunda 1.5 ml mikrofuge tüpleri içine. LMP agarose 37 °C’de erimiş olarak kalacaktır. 37 °C’de LMP agarose’un her 1 ml’lik aliquotuna 40 μl 4 mg/ml (25x), pH 7.0 trikain ekleyin. Kalan LMP agarose’ları 4 °C’de kap…
Materials
| LMP agarose (Ultrapure LMP agarose) | Invitrogen | 16520100 |
| Tricaine (powder) (Tricaine Methanesulfonato, Tricaine-S) | Western Chemical Inc | MS 222 |
| Glass-bottom 6-well plates used for imaging | MatTek | P06G1.5-20-F |
| 10 ml pipette pump (green) (Pipette Pump Pipettor) | Novatech International | F37898-0000 |
Citar este artigo
Agar Mounting: A Basic Method of Mounting Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20187, doi: (2023).