Overview
يصف هذا الفيديو تقنية عزل الأمعاء لتقييم امتصاص الأمعاء للمركبات النشطة بيولوجيا. في هذه العينة، سنقوم بعزل الأمعاء عن حمار وحشي بالغ لتحليل امتصاص المنشطات المناعية.
Protocol
1. زيبرافيش الأمعاء تشريح
- بعد فترة زمنية محددة بعد التنبيب(على سبيل المثال، 5 ساعة و / أو 24 ساعة)، ضع السمك باستخدام شبكة في محلول ميثان الميثان (MS-222) 300 ملغم/لتر إيثيل 3-أمينوبنزوات ميثانسولفونات (MS-222) للقتل الرحيم. تأكد من أن operculum يتوقف عن التحرك وليس هناك منعكس قرصة الذيل. خمس دقائق عادة ما تكون كافية.
- التقاط الحيوان القتل الرحيم مع شبكة ووضعه على ورقة تصفية.
ملاحظة: ورقة التصفية مفيدة جدا لإزالة الأنسجة اللاصقة على طول الأمعاء. - باستخدام مقص تشريح حاد ، قم بعمل شق شبه دائري من فتحة النلق إلى فتحة الظهر وشق مفتوح باستخدام ملاقط دقيقة. قطع طرفي الأمعاء، والخروج من جميع الأجهزة الداخلية، ووضعها على ورقة التصفية.
تحذير: العمل بسرعة للحد من استقلاب الخلايا والموت.
ملاحظة: بدلا من ذلك، إزالة الأنسجة اللاصقة في برنامج تلفزيوني وعلى الجليد. - فصل الأمعاء من الأعضاء الداخلية مع التأكد من الحفاظ على اتجاهها (الأمامي إلى الجزء المعوي الخلفي) وتمتد بها. عادة، الجزء الأمامي من الأمعاء أوسع من الجزء الخلفي. الحرص على الحصول على جميع الأمعاء عند تشريح.
ملاحظة: النهاية الخلفية على ما يرام وهشة جدا في الأسماك الصغيرة، ويمكن أن تنفصل، لا سيما في الحيوانات < 0.7 غرام. - لفة الأمعاء على ورقة تصفية مع ملاقط من أجل فصل الأنسجة اللاصقة من الأمعاء.
- المضي قدما لإعداد الأمعاء لمختلف التحليلات المصب
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MS-222 | Sigma Aldrich | E10521 | powder |
| 10x PBS | Sigma Aldrich | P5493 | |
| Filter paper | Filter-Lab | RM14034252 |
