Overview
该视频描述了分离肠道以评估生物活性化合物的肠道吸收的技术。在这个样本中,我们将从成年斑马鱼中分离出肠道,以分析免疫刺激剂的摄取量。
Protocol
1. 斑马鱼肠解剖
- 在指定时间段后插管(例如,5 h 和/或 24 h),将使用网的鱼放入 300 毫克/L 乙基 3-氨基苯甲酸酯甲烷硫酸酯 (MS-222) 安乐死解决方案中。确保操作库停止移动,并且没有尾部捏反射。五分钟通常就足够了。
- 拿起安乐死的动物用网,并将其放在过滤纸上。
注: 滤纸非常有助于去除肠道沿线的粘合组织。 - 使用锋利的解剖剪刀,用细钳子将肛门切成半圆形切口,并打开切口。切开肠的两端,取出所有内脏,放在滤纸上。
注意事项: 快速工作,以减少细胞代谢和死亡。
注: 或者,去除PBS和冰上的粘合组织。 - 将肠道与内脏分离,确保保持其方向(前肠到后肠段),并伸展肠道。通常,肠前部比后段宽。解剖时注意获得所有的肠道。
注: 后端是相当精细和脆弱的小鱼,并可能脱落,特别是在动物 <0.7 g. - 用钳子将肠子卷在滤纸上,以便将粘合组织从肠道中分离出来。
- 继续为各种下游分析准备肠子
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Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
MS-222 | Sigma Aldrich | E10521 | powder |
10x PBS | Sigma Aldrich | P5493 | |
Filter paper | Filter-Lab | RM14034252 |