Voksen Zebrafish Tarm Dissektion: En teknik til at analysere sammensatte absorption

Overview

Denne video beskriver teknikken til at isolere tarmen for at evaluere tarmoptagelsen af bioaktive forbindelser. I denne prøve isolerer vi tarmen fra en voksen zebrafisk for at analysere optagelsen af immunstimulerende midler.

Protocol

1. Zebrafisk Tarm Dissektion

1. Efter en bestemt periode efter intubation(f.eks. 5 timer og/eller 24 timer) anbringes fisken med et net i 300 mg/L ethyl 3-aminobenzoatmetansulfonatopløsning (MS-222) til aktiv dødshjælp. Sørg for, at operculum holder op med at bevæge sig, og at der ikke er nogen hale knivspids refleks. Fem minutter er normalt tilstrækkeligt.
2. Hent det aflivede dyr med et net og læg det på et filterpapir.
   BEMÆRK: Filterpapiret er meget nyttigt til fjernelse af klæbevævet langs tarmen.
3. Brug skarpe dissektion saks, lave en halvcirkelformet snit fra anus til operculum og åbne snit ved hjælp af fine pincet. Skær begge ender af tarmen, tag alle de indre organer ud, og læg dem på filterpapiret.
   ADVARSEL: Arbejd hurtigt for at reducere cellemetabolisme og død.
   BEMÆRK: Alternativt kan du fjerne det klæbevæv i PBS og på is.
4. Adskil tarmen fra indre organer og sørg for at holde sin orientering (forreste til bageste tarmsegment) og strække det ud. Normalt er det forreste segment af tarmen bredere end bageste segment. Vær omhyggelig med at få alle tarmene, når dissekere.
   BEMÆRK: Den bageste ende er ganske fin og skrøbelig i små fisk og kan bryde ud, især hos dyr <0,7 g.
5. Rul tarmen på filterpapiret med pincet for at løsne det klæbevæv fra tarmen.
6. Fortsæt med at forberede tarmen til forskellige downstream-analyser

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MS-222	Sigma Aldrich	E10521	powder
10x PBS	Sigma Aldrich	P5493
Filter paper	Filter-Lab	RM14034252