Dissection adulte de l’intestin du poisson zèbre : une technique pour analyser l’absorption des composés

Overview

Cette vidéo décrit la technique d’isolement de l’intestin pour évaluer l’absorption intestinale des composés bioactifs. Dans cet échantillon, nous isolerons l’intestin d’un poisson zèbre adulte pour analyser l’absorption des immunostimulants.

Protocol

1. Dissection de l’intestin du poisson zèbre

1. Après une période déterminée après l’intubation(p. ex., 5 h et/ou 24 h), placez le poisson à l’aide d’un filet dans une solution d’euthanasie à 300 mg/L d’éthyl 3-aminobenzoate de méthane (MS-222). Assurez-vous que l’operculum cesse de bouger et qu’il n’y a pas de réflexe de pincement de la queue. Cinq minutes suffisent normalement.
2. Prenez l’animal euthanasié avec un filet et placez-le sur un papier filtre.
   REMARQUE: Le papier filtre est très utile pour enlever le tissu adhésif le long de l’intestin.
3. À l’aide de ciseaux de dissection tranchants, faire une incision semi-circulaire de l’anus à l’operculum et ouvrir l’incision à l’aide de pinces fines. Couper les deux extrémités de l’intestin, sortir tous les organes internes, et les placer sur le papier filtre.
   MISE EN GARDE: Travaillez rapidement pour réduire le métabolisme cellulaire et la mort.
   REMARQUE: Alternativement, retirez le tissu adhésif dans PBS et sur la glace.
4. Séparez l’intestin des organes internes en s’assurant de garder son orientation (antérieure au segment intestinal postérieur) et de l’étirer. Habituellement, le segment antérieur de l’intestin est plus large que le segment postérieur. Prenez soin d’obtenir tout l’intestin lors de la dissécation.
   REMARQUE: L’extrémité postérieure est assez fine et fragile chez les petits poissons et peut se détacher, en particulier chez les animaux <0,7 g.
5. Rouler l’intestin sur le papier filtre à l’aide d’une pince à épiler afin de détacher le tissu adhésif de l’intestin.
6. Procéder à la préparation de l’intestin pour diverses analyses en aval

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MS-222	Sigma Aldrich	E10521	powder
10x PBS	Sigma Aldrich	P5493
Filter paper	Filter-Lab	RM14034252