Overview
Это видео описывает технику изоляции кишечника для оценки кишечного поглощения биологически активных соединений. В этом образце мы изолируем кишечник от взрослой зебры, чтобы проанализировать поглощение иммуностимуляторов.
Protocol
1. Вскрытие кишечника зебры
- После определенного периода времени после интонации(например, 5 ч и / или 24 ч), поместите рыбу с помощью сети в 300 мг/л этилового 3-аминогензоатного метансульфоната (MS-222) раствор для эвтаназии. Убедитесь, что оперкулум перестает двигаться и нет хвоста щепотку рефлекс. Пять минут, как правило, достаточно.
- Возьмите усыпанное животное сеткой и поместите его на фильтровальную бумагу.
ПРИМЕЧАНИЕ: Фильтровальная бумага очень полезна для удаления клейкой ткани вдоль кишечника. - Используя острые ножницы для вскрытия, сделайте полукруглый разрез от ануса до оперкулума и откройте разрез с помощью тонкого пинцета. Вырезать оба конца кишечника, вынул все внутренние органы, и поместить их на фильтровальную бумагу.
ВНИМАНИЕ: Работа быстро, чтобы уменьшить метаболизм клеток и смерти.
ПРИМЕЧАНИЕ: Кроме того, удалить клей ткани в PBS и на льду. - Отделить кишечник от внутренних органов убедившись, чтобы сохранить свою ориентацию (перед задним до заднего кишечного сегмента) и растянуть его. Как правило, передний сегмент кишечника шире заднего сегмента. Позаботьтесь, чтобы получить все кишечника при вскрытии.
ПРИМЕЧАНИЕ: Задний конец довольно тонкий и хрупкий в мелкой рыбе и может оторваться, особенно у животных Lt;0.7 g. - Ролл кишечника на фильтровальной бумаге с пинцетом для того, чтобы отделить клей ткани из кишечника.
- Продолжить подготовку кишечника для различных анализов вниз по течению
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MS-222 | Sigma Aldrich | E10521 | powder |
| 10x PBS | Sigma Aldrich | P5493 | |
| Filter paper | Filter-Lab | RM14034252 |
