Disección adulta del intestino del pez cebra: una técnica para analizar la absorción compuesta

Overview

Este video describe la técnica de aislar el intestino para evaluar la absorción intestinal de compuestos bioactivos. En esta muestra, aislaremos el intestino de un pez cebra adulto para analizar la absorción de inmunoestimulantes.

Protocol

1. Disección del intestino del pez cebra

1. Después de un período de tiempo especificado después de la intubación(por ejemplo, 5 h y/o 24 h), coloque el pescado utilizando una red en 300 mg/L etílico 3-aminobenzoato methanesulfonato (MS-222) solución para eutanasia. Asegúrese de que el operculum deje de moverse y no haya reflejo de pellizcar la cola. Cinco minutos normalmente son suficientes.
2. Recoge al animal eutanasiado con una red y colóquelo en un papel de filtro.
   NOTA: El papel filtrante es muy útil para extraer el tejido adhesivo a lo largo del intestino.
3. Usando tijeras de disección afiladas, haz una incisión semicircular desde el ano hasta el operculum y abre la incisión usando pinzas finas. Corte ambos extremos del intestino, saque todos los órganos internos y colóquelos en el papel filtrante.
   PRECAUCIÓN: Trabajar rápidamente para reducir el metabolismo celular y la muerte.
   NOTA: Alternativamente, retire el tejido adhesivo en PBS y sobre hielo.
4. Separe el intestino de los órganos internos asegurándose de mantener su orientación (anterior al segmento intestinal posterior) y estirarlo. Por lo general, el segmento anterior del intestino es más ancho que el segmento posterior. Tener cuidado de obtener todo el intestino al diseccionar.
   NOTA: El extremo posterior es bastante fino y frágil en peces pequeños y puede romperse, particularmente en animales <0.7 g.
5. Enrolle el intestino sobre el papel filtrante con pinzas para separar el tejido adhesivo del intestino.
6. Proceda a preparar el intestino para varios análisis aguas abajo

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MS-222	Sigma Aldrich	E10521	powder
10x PBS	Sigma Aldrich	P5493
Filter paper	Filter-Lab	RM14034252