Organkonditioniertes Medium: Generierung von Medium aus geernteten Organzellen für metastasierende Krebsstudien

Abstract

Quelle: Piaseczny, M.M., et al. Generation of Organ-conditioned Media and Applications for Studying Organ-specific Influences on Breast Cancer Metastatic Behavior. J. Vis. Exp.(2016).

Dieses Video beschreibt eine Methode zur Erzeugung eines organkonditionierten Mediums, das von der Mausleber abgeleitet wurde. Dieses Modellsystem kann verwendet werden, um organisch abgeleitete lösliche Faktoren und ihre Auswirkungen auf den Organtropismus und das metastasierende Verhalten von Krebszellen zu identifizieren und zu untersuchen.

Protocol

1. Erzeugung von Lungen- und Hirn-Konditionierten Medien In einer sterilen Gewebekulturhaube, invertieren PBS-Röhren mit Lunge oder Gehirn dreimal, um Restblut aus Den Organen zu entfernen und PBS enthaltend zu saugen. Wiederholen Sie dies mit frischer kälter PBS, bis die Lösung klar und ohne Blutnachweis erscheint. Lunge und Gehirn in separate 60 mm2 Glaspetrischalen geben. Verwendung von zwei sterilen Skalpellklingen, Hackfleischlungen oder Gehirnen durch wiederholtes Hin- und He…

Materials

1x Phosphate-buffered saline	ThermoFisher Scientific	10010-023	Keep sterile
60 mm2 glass petri dishes	Sigma-Aldrich	CLS7016560	Keep sterile
DMEM:F12	Life Technologies	21331-020	Warm in 37 °C water bath before use, keep sterile
Penicillin-Streptomycin (10,000 U/ ml)	Life Technologies	15140-122	Keep sterile
50 ml conical tubes	Thermo Scientific (Nunc)	339652	Keep sterile
0.22 μm syringe filters	Sigma-Aldrich	Z359904	Keep sterile
6-well tissue culture plates	Thermo Scientific (Nunc)	140675	Keep sterile
Scalpel blades	Fisher Scientific	S95937A	Keep sterile